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RNA-DNAzyme的研究

论文摘要

核酶（ribozyme or RNAzyme）是一类具有催化活性的单链寡RNA 分子,它能通过碱基配对特异性地切割底物RNA 分子。脱氧核酶（Deoxyribozyme or DNAzyme or DNA enzyme）是20 世纪90 年代才被人们所发现的一类具有催化活性的DNA 分子。我们以β-内酰胺酶mRNA 为靶位点, 设计并合成了RNA-DNAzyme（Rz-Dz）基因,将其克隆到pBluescript II KS（+） phagemid 中,通过噬菌体表达系统产生含有DNAzyme 序列的单链环状DNA 分子（dRz-Dz）。体外实验表明,dRz-Dz 在某些二价金属离子辅助下具有特异性切割RNA 底物的活性。将重组质粒经体外转录后,其转录产物（rRz-Dz）含RNAzyme 序列。rRz-Dz 的体外实验表明,此核酶部分也有特异切割底物RNA的活性,且此活性在一定范围内与Mg2+的离子浓度成正比。将构建的Rz-Dz、RNAzyme（Rz）、DNAzyme（Dz） 重组子和pBluescript II KS（+） phagemid（pBS）质粒电转化到Ampr 的耐药菌TEM-1 和TEM-3 中,测定转化菌的β-内酰胺酶的活力,结果为:Rz-Dz<Rz<Dz<pBS;测定抑菌率,结果为:Rz-Dz>Rz>Dz,表明Rz-Dz 由于切割β-内酰胺酶mRNA 的活力比Rz、Dz 高,而表现出更高的抑制耐药菌生长的能力。证明了Rz-Dz 同时具有RNAzyme 和DNAzyme 的切割β-内酰胺酶mRNA 的活性。

论文目录

  • 第一章 前言
  • 1.1 概述
  • 1.2 核酶研究近况
  • 1.3 脱氧核酶研究近况
  • 1.4 本研究的意义
  • 第二章 实验材料及设备
  • 2.1 仪器与试剂
  • 2.2 其它实验材料
  • 第三章 实验原理及方法
  • 3.1 实验原理与设计
  • 3.2 目的基因及其互补链的合成
  • 3.3 pBluescript II KS（+）phagemid 的扩增
  • 3.4 Rz-Dz,Rz,Dz 基因分别与载体质粒连接
  • 3.5 重组质粒的转化
  • 3.6 重组子的筛选与鉴定
  • 3.7 Rz-Dz 重组质粒单链的提取及纯化
  • 3.8 RNA-DNAzyme 的体外切割反应
  • 3.9 RNA-DNAzyme 的体内切割反应
  • 第四章 实验结果
  • 4.1 pBluescript II KS（+）噬菌粒的扩增
  • 4.2 pBluescript II KS（+）噬菌粒双酶切及其大片段纯化
  • 4.3 目的基因与载体连接
  • 4.4 重组质粒的转化及重组子的筛选、鉴定
  • 4.5 dRz-Dz 的提取及纯化
  • 4.6 dRz-Dz 的脱氧核酶活性的酶学性质分析
  • 4.7 核酶部分的体外转录
  • 4.8 rRz-Dz 的酶学性质分析
  • 4.9 RNA-DNAzyme 的体内活性测定
  • 第五章 讨论
  • 5.1 RNA-DNAzyme（Rz-Dz）基因的设计
  • 5.2 载体的选择
  • 5.3 dRz-Dz 酶促反应动力学
  • 5.4 rRz-Dz 酶促反应动力学
  • 5.5 RNA-DNAzyme 体内活性的测定
  • 5.6 应用与展望
  • 第六章结论
  • 参考文献
  • 摘要
  • Abstract
  • 致谢

    • 相关论文文献

    本文来源: https://www.lw50.cn/article/273c5feca2343a8f50e7d4a0.html