一、Cyclophilin A在ox-LDL诱导的巨噬细胞荷脂过程中表达的改变及其影响 目的 通过ox-LDL诱导的巨噬细胞荷脂化模型,观察胆固醇转运复合物中关键蛋白Cyclophilin A在细胞荷脂过程中的表达变化及其与细胞内胆固醇蓄积的关系,进而分析Cyclophilin A在巨噬源性荷脂细胞形成过程中的作用。 方法 实验采用75mg/L ox-LDL与RAW264.7巨噬细胞共同孵育不同的时间,建立巨噬细胞荷脂化模型;Western-blot、免疫荧光法分别定量、定位检测Cyclophilin A和Caveolin-1蛋白的表达改变;油红O染色观察细胞内脂滴的形成情况;高效液相色谱法检测细胞内胆固醇含量变化;放射性同位素法检测细胞内胆固醇流出情况。 结果 75mg/Lox-LDL与RAW264.7细胞共同孵育48小时后,Cyclophilin A的蛋白表达逐渐减弱,48小时、72小时分别较未处理组下降了54.5±6.3%、59.8±5.9%,与此同时,胆固醇转运复合物中另一关键蛋白Caveolin-1蛋白的表达,与未处理组比较,48小时下降了66.5±6.8%,72小时下降了71.8±6.9%,差异均有显著性,P均<0.05。间接免疫荧光定位检测发现ox-LDL显著抑制RAW264.7细胞中Cyclophilin A与Caveolin-1在胞膜、胞浆中的表达,且随着处理时间的延长,作用更明显。油红O染色显示在ox-LDL处理细胞48小时后,细胞内有大量脂滴的形成,细胞内总胆固醇含量不断增加,由Caveolin-1的192.1±9.5μg/mg蛋白增加至处理细胞48小时为455.5±
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