目的：人乳头状瘤病毒（HPV）早期区域中的E6基因是其最主要的编码癌蛋白的癌基因之一，且文献报道，HPV-E6基因与喉癌细胞的永生化有关。本研究拟采用RNA干涉的方法封闭喉癌细胞系Hep-2中HPV-E6基因表达,探讨其表达下调对喉癌细胞的增殖活性影响,进一步分析该基因与喉癌发生和发展的关系,为喉癌基因治疗筛选新的靶标。方法：（1）PCR扩增survivin启动子，回收扩增产物并替换用Ambion公司pSilencer-4. 1载体cmv启动子。设计针对HPV18-E6基因的siRNA两对并分别构建针对HPV18-E6基因的siRNA真核表达载体,酶切和测序鉴定。（2）以携带HPV18-E6基因的人喉癌Hep－2细胞系为靶细胞，应用PCR的方法方法得到HPV18-E6基因，回收其片断，并且连接入pGEM-T-Easy载体，测序鉴定，命名为E6-T-Easy。再用此质粒作为模版，构建一个real-time PCR体系所需要得标准品质粒，命名为E6’-T-Easy。（3）以携带HPV18-E6基因的人喉癌Hep－2细胞系为靶细胞，通过阳离子脂质体法转染siRNA表达载体,并用G418筛选稳定转染细胞系。（4）Realtime PCR和Western blot方法检测转染后细胞HPV18-E6基因mRNA和蛋白表达水平。（5）MTT检测细胞增殖情况；流式细胞仪分析细胞增殖周期的改变。结果：（1）成功构建了人HPV18-E6基因的RNA干涉真核表达载体命名为pSilencer4.1-Surp neo-E1和pSilencer4.1- Surp neo-E2。经酶切鉴定和测序鉴定正确；（2）成功从喉癌Hep-2细胞系中克隆出HPV18-E6基因全长片段，经酶切鉴定和测序鉴定与gene bank所提供的序列一致；（3）干涉载体转染细胞后，筛选出HPV18-E6基因mRNA和蛋白均表达下调的稳定转染喉癌细胞系；（4）E6基因的表达下调诱导喉癌细胞增殖活性明显下降；（5）E6基因的表达下调诱导G0/G1期细胞比例增加最高达30.4％,同时G2/M期细胞比例减少增加20％。结论:两个干涉载体在喉癌Hep-2细胞系中均能下调HPV18-E6基因表达,且pSilencer4.1-Surp neo-E1抑制作用最强。HPV18-E6基因的表达下调显著降低了Hep-2细胞的生长增殖活性，增殖抑制可能和细胞周期G0/G1阻滞有关。靶向性封闭HPV18-E6基因表达则为喉癌治疗的新靶点开发奠定了实验室基础。
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