目的研究GPR4 （ G protein-coupled receptor 4 , GPR4 ）配体溶血卵磷脂（lysophosphatidylcholine,LPC）及鞘氨醇磷脂酰胆碱（sphingosylphosphorylcholine,SPC）对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）的生长效应及有关信号通路。方法采用脂质体2000将装有GPR4受体基因的pEFneo真核表达载体转染HUVEC,并通过G418（800μg/ml）筛选获得GPR4基因稳定表达细胞株;RT-PCR法鉴定稳定转染并检测转染前后GPR4受体mRNA的表达情况;MTT法检测细胞的生长活力;AO染色法观察LPC及SPC对HUVEC细胞造成的形态改变; Western blot法检测LPC及SPC与其受体相互作用后对caspase-3前体、p-JNK、p-Akt及MMP-2蛋白表达的影响。结果成功获得了GPR4基因稳定表达细胞株;随着LPC（0.5,1,2,4,8μmol/l）及SPC（0.25,0.5,1.0μmol/l）浓度的增加, LPC使HUVEC细胞活力下降, 570nm OD值依次为:1.50±0.136;1.45±0.050;1.42±0.208;1.36±0.191;1.32±0.122;1.08±0.189。SPC使细胞活力依次增强,570nm OD值依次为:1.08±0.089;1.15±0.097;1.21±0.096;1.30±0.11。LPC对细胞造成一定的损伤,随着浓度的增加,有些细胞可见致密浓染的黄绿色,而SPC却对细胞形态没有造成明显的改变。LPC使caspase-3前体蛋白的表达先增加后减少,MMP-2蛋白的表达下调,活化JNK激酶,使p-JNK蛋白的表达先增加后减少。SPC使p-Akt及MMP-2的表达先增加后减少,抑制caspase-3前体蛋白的表达。结论1. LPC与受体GPR4作用后使HUVEC细胞活性下降,该作用可能与调节pro-caspase 3、p-JNK及MMP-2蛋白的表达有关;2. SPC与受体GPR4作用后则能够提高HUVEC细胞活力并有一定的促增殖作用,可能与促进p-Akt及MMP-2蛋白的表达有关。
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