目的:本项研究旨在前期研究成果的基础之上,研究独活水煎剂、醇提物对自然衰老小鼠脑细胞凋亡的作用,以及对小鼠学习记忆能力的影响,来探讨独活不同剂型延缓脑老化的作用机制。从而为脑老化机理研究及延缓脑老化的中药研究提供实验依据。 方法:本次实验采用16月龄老年昆明种小鼠96只(体重46.35±6.34克),雌雄各半,随机分成3组,分组如下:正常老年对照组32只;老年独活水煎剂组32只;老年独活醇提物组32只。在中药干预60天后,进行筛选,合格鼠作水迷宫测试,以检测小鼠的学习记忆能力的改变。测试后对正常老年对照组、老年独活水煎剂组和老年独活醇提物组随机选取9只、10只和9只,进入下步实验,进行流式细胞仪观察衰老小鼠的脑细胞凋亡率变化以及脑组织的细胞形态学变化。 结果:(1)学习记忆能力检测:①与青年对照组相比,老年对照组的通过数降低(P<0.01)。说明小鼠衰老后学习记忆能力明显减退。②与老年对照组比较,独活及其醇提物组小鼠的通过数显著升高,且醇提物组更为明显,并有一定的差异。③与独活水煎剂组比较,独活醇提物组的通过数明显增多,说明独活醇提物提高衰老小鼠的学习记忆能力作用更为明显(P<0.05)。 (2) 脑组织的细胞形态学变化: 光镜观察:①可见青年对照组小鼠海马神经细胞形态、大小、数量正常,细胞完好、排列整齐,无细胞变性改变。②老年对照组小鼠脑组织海马神经细胞数量明显减少,细胞排列不整齐;大脑皮层神经细胞可见细胞空泡变性和细胞变性。③独活水煎剂组、独活醇提物组海马神经细胞的数量和细胞排列较老年对照组明显改善,且独活醇提物组好于独活水煎剂组。独活水煎剂组、独活醇提物及青年对照组均未见细胞空泡变性、细胞变性。四组小鼠均未见明显的、典型的老年斑和神经纤维缠结改变。 电镜观察:老年对照组小鼠的神经元细胞可见:①凋亡的早期改变:核体积变小;核异染色体质增多边聚;核畸型,形态不规则,核膜内陷;核膜间隙局部增宽,核膜破坏。②线粒体嵴部分破坏。③粗面内质网轻度扩张,脱颗粒。④细胞质部分溶解。⑤脂褐素大量沉着。⑥有髓神经纤维出现髓鞘分离。
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