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衣藻CrFtsZ2基因的克隆与原核表达

论文摘要

FtsZ是广泛存在于原核生物和植物中的一种功能蛋白,控制着原核细胞和质体的分裂过程。大肠杆菌细胞正常分裂时,FtsZ蛋白最早在细胞中部的分裂位点聚集成环状骨架—Z环,从而启动细胞的分裂过程。叶绿体是植物细胞内的一种重要细胞器,其起源于早期具光合能力的原核生物与原始真核生物的内共生事件。现已证实,植物细胞中内共生起源的叶绿体仍然利用FtsZ蛋白进行分裂,但表达该蛋白的基因已由叶绿体基因组转移到核基因组。与细菌细胞仅含有一个FtsZ基因不同,植物中的FtsZ基因已经进化为2个小的家族。以前的研究认为植物FtsZ蛋白的分歧发生于陆生植物进化的早期阶段。 本论文应用RT-PCR方法从衣藻中克隆了CrFtsZ2的cDNA,其cDNA全长共1815bp。该基因有10个内含子,11个外显子,开放阅读框(ORF)1305bp,共编码435个氨基酸。序列同源性分析表明,其编码的蛋白具有FtsZ蛋白的典型特征,含有FtsZ蛋白共有的两个氨基酸保守区,以及与tubulin类似的GTP结合位点。分子进化分析结果显示衣藻CrFtsZ1、CrFstZ2二者分别属于FtsZ1/FtsZ2亚家族。进一步的基因结构分析以及实验表明:内共生事件发生之后,位于原始叶绿体基因组的FtsZ基因立即转入细胞核,当进化出红藻、绿藻之后,在绿藻分化的早期阶段,绿藻中的FtsZ基因复制产生FtsZ1、FtsZ2。为了进一步鉴定CrFsZ2的功能,将其构建到表达载体上进行原核表达。表型观察发现,外源CrftsZ基因的表达明显影响了宿主大肠杆菌的正常生长,与原核FtsZ基因表达的结果类似,从而初步验证了CrFtsZ2基因结构与功能的保守性。

论文目录

  • 摘要
  • ABSTRACT
  • 第一部分 前言
  • 一、FtsZ蛋白的发现及其生化性质
  • 1.原核FtsZ蛋白与ftsZ基因
  • 2.植物FtsZ蛋白与ftsZ基因
  • 3.与FtsZ蛋白相互作用的蛋白
  • 4.参与细胞分裂过程的其它Fts蛋白
  • 二、FtsZ蛋白在细胞分裂中的作用模式及其功能特征
  • 1.原核细胞FtsZ蛋白的作用模式及其功能特征
  • 2.真核细胞FtsZ蛋白的作用模式及其功能特征
  • 3.FtsZ蛋白在植物质体形态维持中的作用
  • 三、植物FtsZ的系统进化研究
  • 四、学位论文的立题依据和意义
  • 第二部分 材料和方法
  • 一、实验材料与试剂
  • 1.植物材料
  • 2.菌株、质粒载体与主要试剂
  • 3.实验仪器设备
  • 4.培养基配方
  • 二、实验方法
  • 1.CrFtsZ2基因的克隆
  • 2.序列比较与进化分析
  • 3.原核融合表达质粒pLGZ2的构建及重组质粒的鉴定
  • 4.融合表达质粒pLGZ2在大肠杆菌中的表达及显微观察
  • 第三部分 结果与讨论
  • 一、实验结果
  • 1.衣藻CrFtsZ2基因的克隆
  • 2.衣藻CrFtsZ2序列及分子谱系分析
  • 2.1 衣藻CrFtsZ2基因结构分析
  • 2.2 蛋白序列及分子谱系分析
  • 3.衣藻CrFtsZ2基因的原核表达
  • 3.1 质粒pLGZ2的构建及鉴定
  • 3.2.融合表达质粒pLGZ2在大肠杆菌中的表达及显微观察
  • 二、讨论
  • 第四部分 结论与展望
  • 参考文献
  • 硕士在读期间发表的论文
  • 致谢
  • 附录
  • 相关论文文献

    本文来源: https://www.lw50.cn/article/3f0bb355a1bebbebc072e877.html