牛O型口蹄疫病毒内蒙古疫苗株p1基因的克隆与序列分析

论文摘要

本实验应用牛 O 型口蹄疫内蒙古疫苗株,提取病毒总 RNA,以提取的 RNA 为模板,根据已发表的 O/Tibe/CHA/99 株核酸序列,设计并合成引物,通过 RT-PCR 扩增出 FMDV P1 基因,并将其克隆到 pGEM-T easy 载体上,转化 E.Coli DH5α感受态细胞中,经 PCR、以及测序证明得到了 FMDV P1 基因,并利用 DNAStar 软件包中的 SepMan软件进行序列拼接,将所得序列与国内外 FMDV 参考序列进行同源性、差异性比较和分析,绘出遗传进化树图谱。分析结果显示:牛 O 型口蹄疫内蒙古疫苗株与参考毒株 O/UKG/35/2001, O/SAR/19/2000, O/Tibet/CHA/99 等泛亚型（PanAsia）口蹄疫病毒株 P1 基因的同源性分别为 98.6%、98.7%和 99.1% ,为相同的基因型,而与 O1K、O1/Campos、O/AKS/58、O/Yunlin/TaiWan/99 等毒株的同源性为 83%～86.5%,为不同的基因型。牛 O 型口蹄疫内蒙古疫苗株在基因型上属于泛亚毒株。牛 O 型口蹄疫内蒙古疫苗株与其它毒株的差异主要存在于 P1 的第 547～573,656～681,720～734氨基酸之间,特别是在第 656～681 即 VP1 的第 130～160 氨基酸之间差异明显,本试验为进一步研究口蹄疫病毒的分子结构探明病毒的遗传演化关系和研究基因工程疫苗提供数据。

论文目录

1 引言

1.1 口蹄疫概述

1.2 病原学

1.3 流行病学

1.4 发病机理

1.5 临床症状和病理变化

1.6 口蹄疫诊断

1.7 口蹄疫疫苗

1.8 口蹄疫防治

2 材料与方法

2.1 材料

2.1.1 病毒

2.1.2 菌株及质粒

2.1.3 分子生物学试剂

2.1.4 培养基和抗生素

2.1.5 主要仪器设备

2.1.6 引物的设计

2.2 方法

2.2.1 目的基因的扩增

2.2.2 PCR 产物的回收纯化

2.2.3 目的 DNA 与载体的连

2.2.4 感受态细胞的制备

2.2.5 重组质粒的转化

2.2.6 阳性克隆的筛选

2.2.7 质粒的提取

2.2.8 重组质粒的 PCR 鉴定

2.2.9 质粒 DNA 测序

2.2.10 FMDV P1 序列合成

2.2.11 序列比较分析

3 试验结果

3.1 目的基因的 PCR 扩增

3.2 重组pGEM-T/P1 质粒的 PCR 鉴定结果

3.3 重组质粒测序结果

3.4 序列比较分析

4 讨论

4.1 PCR 方法

4.2 FMDV P1 基因序列分析

4.3 口蹄疫病毒的遗传进化

4.4 口蹄疫的免疫预防

4.5 口蹄疫免疫失败的原因

5 结论

致谢

参考文献

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