目的:探讨液氮深低温保存对大月龄胎儿带瓣血管细胞活性的影响,对同种大月龄胎儿血管瓣膜组织库的保存效果进行初步评估。 方法:同种大月龄胎儿带瓣主动脉12例,胎龄20～40周,热缺血时间0～12小时。无菌条件下取材、修剪,每份标本均取两块动脉组织设为对照组和实验组,对照组血管直接进行细胞活性检测,实验组血管经程序降温并在-196℃液氮中保存1周后进行活性检测。通过台盼蓝染色、组织培养和四甲基偶氮唑盐比色法（MTT比色法）,比较冷冻前后胎儿带瓣血管细胞活性的变化,并对成活细胞进行平滑肌a-actin免疫组化染色。 结果:冷冻前后大月龄胎儿带瓣血管均有细胞生长,台盼蓝染色显示对照组胎儿血管细胞活力为（86.4%±0.8%）,实验组血管细胞活力为（79.4%±0.8%）,二者之间差异有显著性意义（t=15.825,P<0.001）,MTT比色法显示对照组细胞在490nm波长的OD值为（0.442±0.046）,实验组细胞的OD值为（0.424±0.041）,二者之间差异无显著性意义（t=1.617,P>0.05）。细胞大多数呈梭形、三角形或星性,部分区域平行重叠生长,呈“峰谷”状,平滑肌a-actin免疫组化染色阴性、阳性细胞混合存在。 结论:液氮冷冻保存后的大月龄胎儿带瓣血管有活细胞存在,细胞活力在一定程度上有所降低,但细胞增殖能力保持良好,为建立有活性的大月龄胎儿同种血管和瓣膜组织库并早日应用于临床提供理论依据。
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