人乳头瘤病毒16型主要衣壳蛋白L1 DNA疫苗的研究 人乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV）是一种重要的致瘤DNA病毒，可引起人生殖道、肛门皮肤和粘膜产生肿瘤。HPV在宫颈癌发生过程中起着重要的作用，在HPV各型中，与宫颈癌发病关系密切的有HPV-16、HPV-18等，在80～90％的宫颈癌组织中可检测到HPV-16和/或HPV-18的存在，HPV-16和HPV-18被认为是妇女宫颈癌的主要病原。目前，临床上尚无预防HPV16感染的措施，中晚期宫颈癌的化疗和手术治疗效果也不理想，因此，研制高效、安全、廉价的疫苗预防HPV感染有着十分重要的意义。由于HPV仅存生于终末分化的上皮组织中，含量很少，缺乏体外培养系统，使HPV减毒疫苗和灭活疫苗的研制难以进行。随着分子生物学的发展和基因工程技术的成熟，HPV疫苗的研究得以快速发展。HPV16L1基因编码病毒的主要衣壳蛋白能诱导产生病毒中和抗体，且L1基因表达后能自发组装成与天然病毒颗粒相似的病毒样颗粒（virus like particles，VLPs），是HPV16预防性疫苗的主要候选抗原。 新疆南部维吾尔族聚居区是宫颈癌的高发区，在前期的研究中，我们已经从新疆南部地区维吾尔族妇女宫颈癌组织中获得HPV16L1基因，该基因发生多位点变异，这些突变引起HPV16L1蛋白疏水性和抗原性的改变，以新疆地区宫颈癌患者组织中HPV16L1基因开展疫苗研究，对预防HPV16新疆流行株的感染将更为有效。本研究是在此基础上开展HPV16L DNA疫苗方面的研究，内容包括：HPV16L1基因在大肠杆菌中的表达及免疫检测；HPV16L1基因疫苗的构建及其免疫效果的检测；同时，从新疆维吾尔妇女宫颈癌组织中克隆了转录因子Skn-la的cDNA，并对其表达进行初步探索。 为得到检测HPV16L1抗体所需的抗原蛋白，构建了pGEX4T-1/HPV16L1原核表达质粒，重组载体转化大肠杆菌BL21（DE3）后IPTG诱导外源基因表达，用SDS-PAGE和Western blot对其进行鉴定和分析。该质粒在大肠杆菌中表达出分子量约为82kDa的蛋白，该蛋白能与HPV16L1抗体发生特异性反应。 DNA疫苗具有诸多优点，但其与传统疫苗相比，其免疫效价还比较低。研究中构建了HPV16L1基因的三种疫苗质粒，将HPV16L1基因直接克隆到真核表达质粒pcDNA3.0上获得pcDNA3/HPV16L1疫苗质粒；为增强HPV16L1 DNA疫苗的免疫效果，
本文来源: https://www.lw50.cn/article/4565abe026717da8e6ff48a2.html