目的研究沙蚕毒素类杀虫剂巴丹对绿猴肾细胞(Vero cell)的毒性作用及ca2+、氧化应激在其引起的细胞损伤中发挥的作用,为研究此类化学物质给人类和动物的危害提供依据。方法以0.01mmol/L-1mmol/L浓度的巴丹作用于Veto细胞4h、8h、12h、24h、48h,通过MTT法观察细胞存活率;以0.01mmol/L-1mmol/L浓度的巴丹作用于Vero细胞8h、12h、24h、48h,检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出率;0.01 mmol/L、0.1 mmol/L、1 mmol/L巴丹作用于vero细胞8h、12、24h后倒置显微镜下观察细胞形态,照相记录;分别以抗氧化剂VitC(维生素C)10μmol/L、50μmol/L、100μmol/L,ca2通道阻滞剂Ver.(维拉帕米)0.001 mmol/L、0.005 mmol/L、0.1 mmol/L,ca2+鳌合剂EGTA 0.5μmol/L、1.25μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L预处理Vero细胞30min后加入0.01mmol/L-1mmol/L浓度的巴丹共同作用于Vero细胞24小时,MTT法检测细胞存活率、LDH漏出率;以10μmol/L、50μmol/L、100μmol/LmVitC,0.001mmol/L、0.005mmol/L、0.1mmol/L Ver.作用于Vero细胞30min后加入各浓度巴丹继续作用1h,荧光分光光度计检测Vero细胞内ROS含量。结果巴丹能引起Vero细胞LDH漏出率升高、细胞存活率下降、细胞内ROS水平升高,呈时间、剂量依赖关系,细胞形态变化明显,出现坏死,时间延长、剂量加大,细胞坏死加快。应用VitC、Ver.后细胞坏死减轻,细胞存活率增高,LDH漏出率下降,ROS降低。应用EGTA后,细胞坏死加重。结论巴丹对Vero细胞存在明显毒性作用,ca2+以及氧化应激在其引起的细胞坏死中发挥重要作用。对进一步研究沙蚕毒素类农药引起细胞损伤的机理奠定基础,为研究和防治沙蚕毒素类农药造成的人类及动物的危害提供依据。
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