①目的:在大肠杆菌中克隆和表达汉滩病毒S基因的截短片段,型特异性抗原汉滩型和汉城型,表达的重组蛋白可用于汉坦病毒的快速诊断和分型诊断。②方法:从一名急性期HFRS病人外周血中提取汉坦病毒的RNA为模板,以特异性的引物逆转录获得相应的cDNA,经套式PCR扩增出汉坦病毒S片段部分编码基因,插入T-A载体后进行核苷酸测序,将获得的序列使用NCBI Blast软件对排分析证实为汉滩型,申请GenBank号:AY425612。对该序列所编码的部分核衣壳蛋白进行抗原性分析,证实其具有组、型特异性抗原决定簇,这些决定簇均为非构象依赖性。人工合成汉滩型S基因733-936bp片段,以汉滩病毒截短核蛋白的重组质粒为模板,PCR扩增得到汉滩病毒S基因1-249bp片段,PCR连接两片段,得汉滩型特异性抗原基因,同时人工合成汉城型739-951bpS基因片段。将上述基因分别克隆到原核表达载体pGEX4T-2中,重组质粒转化宿主菌DH5α,经IPTG诱导表达目的融合蛋白,蛋白纯化后用SDS-PAGE与Western blotting鉴定其抗原性和特异性。③结果:获得表达汉坦病毒,汉滩病毒和汉城病毒抗原的三种重组菌,Western blotting鉴定表明重组蛋白有良好的抗原性和特异性,可用于汉坦病毒快速诊断和分型诊断。④结论:在原核表达系统中成功重组表达了汉坦病毒,汉滩病毒和汉城病毒抗原,三种蛋白在汉坦病毒的诊断中具有一定的价值。
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