背景:脊髓损伤（Spinal Cord Injury,SCI）及其继发的病理生理效应可直接导致神经功能的丧失,造成组织器官功能的障碍,具有相当高的致残率和死亡率。到目前为止,修复人类损伤脊髓的目标仍然是一个非常棘手的难题。目前的研究认为导致损伤脊髓的结构和功能难以恢复的主要原因是:损伤后不适宜的内部微环境导致绝大部分轴突的再生努力归于失败,即所谓“夭折性再生”。神经干细胞（Neural Stem Cell,NSC）是中枢神经系统（central neural system,CNS）中具有自我更新能力和多向分化潜能的细胞,能被大量扩增、并可在体内和体外诱导分化成CNS内主要的三种细胞:神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞,是CNS损伤后再生修复的理想材料和基因载体。本实验首次探索以同时携带神经营养因子-3（NT-3）和绿色荧光蛋白（GFP）的lentivirus为载体,构建分泌NT-3的鼠胚基因工程NSC和以lentivirus为载体构建表达多基因的人胚NSC的可行性,目的是为SCI的实验研究和临床研究提供可供移植的重要细胞资源。在此基础上探索了移植分泌NT-3的鼠胚基因工程NSC、移植普通鼠胚NSC以及lentivirus介导的直接体内转基因治疗三种方法对损伤脊髓功能恢复的影响,比较和评价三种治疗方法对损伤脊髓功能恢复的作用和潜在应用前景,目的是探索基因调控和基因治疗修复SCI的新途径。 第一部分Lentivirus介导分泌NT3的鼠胚基因 工程神经干细胞构建实验研究 目的:探索以lentivirus为载体,构建同时表达NT-3和GFP的鼠胚基因工程NSC的可行性。方法:①应用无血清培养技术从孕14d胎鼠皮层分离、培养并鉴定鼠胚NSC。②经携带NT-3和GFP标记基因的Lentivirus转染,构建成分泌NT-3的基因工
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