从Folkman博士最先提出肿瘤生长依赖血管生成假说[1]开始到现在抑制血管新生治疗肿瘤历经30多年,抗血管新生治疗肿瘤已经为肿瘤的生物治疗开辟了一个新的领域。研究表明,白血病虽然不是实体瘤,但血管新生与其发生、发展却有着密切的联系。血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）是肿瘤的生长、浸润和转移过程中不可缺少的物质。通过自分泌及旁分泌途径促进白血病细胞的增殖。因此,以VEGF为靶点在白血病治疗中的作用逐渐受到人们的重视。可溶性血管内皮细胞生长因子受体1（sFlt-1）,作为内源性血管生成负调控因子,在抗血管生成中具有潜在的应用前景。在以前的研究中,我们已经明确sFlt-1能够抑制白血病细胞的增殖。证实将sFlt-1cDNA转染骨髓基质细胞,在体外能稳定表达,其基因产物能够抑制白血病细胞增殖。本实验进一步将其移植到裸鼠体内,明确转基因干细胞在小鼠体内归巢,表达基因产物的特性,为进一步开展抗VEGF基因治疗奠定基础。在本实验中,为了提高目的基因的转染效率及移植后靶细胞的归巢性,我们采用了逆转录病毒表达载体,靶细胞选择逆转录病毒易感的脐血干细胞,同时采用骨髓腔注射等方法来提高靶细胞的归巢。最后检测骨髓中蛋白的表达情况。实验结果表明,以MSCV逆转录病毒为表达载体,通过逆转录病毒介导法转染脐血干细胞后,在转录水平上验证了转基因脐血干细胞有sFlt-1mRNA表达。经流式细胞仪检测,转染率为13.5%。将转基因脐血干细胞进行裸鼠移植,在移植2天后的裸鼠骨髓中未发现有sFlt-1蛋白的表达,第7天达高峰,第14、21天仍有表达。且分泌的sFlt-1蛋白能中和K562细胞所产生的VEGF,使K562细胞培养上清中VEGF的浓度降低。同时使K562细胞的生长受到抑制。即sFlt-1通过阻断肿瘤细胞的自分泌途径而抑制其生长。本研究论证了可以通过转基因和移植技术在裸鼠体内获得有活性的sFlt-1的蛋白表达,为进一步开展抗VEGF基因治疗白血病的动物实验奠定了基础。
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