目的探讨曲霉菌半乳甘露聚糖抗原(GM)酶联免疫吸附试验(ELISA)和巢式聚合酶链反应(PCR)检测方法对于临床早期诊断血液病患者合并侵袭性曲霉菌感染(Invasive aspergillosis,IA)的应用价值。方法用巢式PCR和GM ELISA两种方法连续检测96例血液病合并曲霉菌感染的患者,标本包括每周两次的血清和支气管肺泡灌洗液(BALF),并根据欧洲癌症研究治疗组织(EORTC)的标准结合回顾性判定标准,将研究对象分为确诊IA、可疑IA和排除IA三个类别,分别研究和对比两种诊断试验的评价指标。结果共收集96例患者血清标本326份,BALF标本12份。根据回顾性判定标准,96例患者中包括确诊IA 28例,疑似IA 20例,排除IA 48例。(1)GM ELISA根据ROC曲线分析认为单次OD Index≥0.5为最佳界值,评价指标的结果为敏感性85.7%,特异性91.6%,阳性预测值85.7%,阴性预测值91.6%;BALF选取I≥1.0的界值相对较理想,敏感性50%,特异性100%。血清GM定量检测能很好地反应和判断(IA)的病情进展和预后,GM ELISA检测提示阳性比临床怀疑IA提前6天,采用GM检测结果指导先发抗真菌治疗能减少31.5%的过度治疗和药物毒性(2)巢式PCR能特异性扩增出多种曲霉菌菌株18S rRNA,检测灵敏度为5.0 fg/ml。巢式PCR按照两次阳性作为判定标准,其结果为敏感性92.9%,特异性100%,阳性预测值100%,阴性预测值96.0%。BALF敏感性75%,特异性60%。连续阳性结果的次数和预后具有相关性,抗真菌治疗容易导致巢式PCR间断性阳性。PCR结果提示阳性比临床怀疑IA平均提前9天。结论(1)GM ELISA血清标本OD index单次≥0.5为最佳界值。(2)GM ELISA方法具有良好的敏感性和特异性,分别为85.7%和91.6%。是一种快速,可靠和实用的早期诊断侵袭性曲霉菌感染的手段。(3)GM检测对于高危血液病患者先发抗真菌治疗具有很好的指导意义。(4)按照两次阳性结果作为判定PCR阳性的标准可以获得很高的敏感性和特异性,分别为92.9%和100%。(5)血清标本巢式PCR对于未进行抗真菌治疗的高危血液病患者侵袭性曲霉菌感染的筛检具有较好的诊断价值。
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