目的分离纯化大鼠骨髓间充质干细胞（bone mesenchymal stem cells, BMSCS）,进行干细胞特性鉴定,并进行肝细胞样细胞的体外定向诱导分化。方法全骨髓贴壁法分离纯化大鼠BMSCs,流式细胞仪检测其细胞表面标志和细胞周期,细胞免疫化学法进行碱性磷酸酶及Nestin染色,证明其向成骨、神经祖细胞方向分化的潜能;采用HGF、肝切除后血清体外诱导BMSCs 3、7、14、21天,RT-PCR及细胞免疫化学方法检测AFP、ALB的表达情况。结果大鼠骨髓中分离纯化后的细胞,符合BMSCs的形态特征,超过99%的细胞表面标志为CD29+、CD90+、CD45-,细胞周期分析示超过85%处于G0/G1期,具有向骨、神经祖细胞分化的潜能,HGF及血清诱导下,不同的时间点可检测到AFP、ALB的mRNA表达,ALB较AFP的mRNA表达滞后。细胞免疫化学法能检测到胞浆内AFP、ALB的表达。结论本实验分离纯化的细胞,确为BMSCs,具有干细胞特性,具有向肝实质细胞方向定向分化的潜能,可作为肝干细胞来源。
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