分泌型免疫球蛋白A（secretory immunoglobulin A，SIgA）是黏膜免疫最重要的执行者，是外分泌液中存在的一种最主要的抗体。SIgA在黏膜免疫中通过免疫清除、免疫屏障及中和作用等将病原微生物排出体外，达到保护机体的目的。分泌乳汁的乳腺因产生SIgA为主的抗体而作为整个黏膜免疫系统的一部分。乳汁中SIgA能特异性预防新生仔畜胃肠道感染。本研究将牛初乳经10000r／min离心所得的乳清过葡聚糖G-200凝胶层析柱得IgA和IgG混合蛋白，再过纤维素DEAE-52柱纯化牛IgA，经SDS-PAGE电泳鉴定为单体IgA。免疫兔制备兔抗牛IgA抗体，然后用辣根过氧化酶标记，制备兔抗牛IgA酶标抗体。应用本研究建立双抗体夹心ELISA对吉林春光奶牛场和吉林农大南场具有代表性的样品进行检测，为深入研究黏膜免疫及与黏膜免疫有关的疾病提供一定依据。采用鼠抗牛IgA血清粗提蛋白作为包被抗原，建立用于检测牛乳中IgA的双抗体夹心ELISA。双抗体夹心ELISA程序：鼠抗牛IgA抗体以包被液（碳酸盐缓冲液）稀释成最适包被浓度30ug／ml，分别吸取100μl，包被反应板置37℃温育3h后，再于4℃冰箱过夜，同时各板设初乳和酶标抗体对照。次日甩去包被液，以含0.05％Tween-20的0.01Mmol／L pH7.4 PBS（PBST）作为洗涤液，洗涤3次，每次3min（以下简称3×3 min洗涤）。将牛乳用稀释液二倍稀释，每孔加入100μl，37℃温育1h，3×3 min洗涤。将兔抗牛酶标抗体用0.05％BSA-PBST液稀释至工作浓度，每孔加入100μl，37℃温育1h，3×3 min洗涤。每孔加入新配制的底物（OPD）溶液100μl，37℃湿盒避光作用20min。每孔加2M H2SO4一滴终止反应，以DG-3022A型酶联免疫检测仪测定OD值（波长490nm），判定结果。先对吉林春光奶牛场的178头无乳房炎的奶牛分四个乳区进行采样，将采集的688份奶样应用本研究建立的双抗体夹心ELISA检测方法进行检测，结果表明，同一头牛同一时期四个乳区IgA含量差异不显著。再对吉林春光奶牛场和吉林农大南场941头份样品进行检测，结果显示，奶牛泌乳期全程都有IgA抗体的存在，由双抗夹心ELISA OD值与IgA含量回归方程y=1.1985·x2.1819（R2=0.9927）得出奶牛产后1-3天（初乳）和70-190天所分泌的乳中IgA的含量显著高于其他时期。（P＜0.05）
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