目的:克隆人α-防御素-1（HNP-1）的cDNA,并且构建其真核表达载体。 方法:分离获得人外周血中的多形核粒细胞,提取粒细胞中的总RNA,反转录为cDNA,将cDNA作为模板,采用PCR的方法,以设计的P1/P1引物对其进行扩增,得到人α-防御素-1（HNP-1）的基因片断。将扩增产物连接入pGEM-T克隆载体,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,蓝白筛选,对PCR及酶切鉴定含有目的片断的克隆进行测序。经测序证实无误后,对获得的pGEM-T-HNP-1重组质粒上的HNP-1基因亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1（-）上,构建HNP-1的真核表达载体pcDNA3.1-HNP-1。 结果:获得预期大小为303bp的RT-PCR产物;经PCR、酶切鉴定和DNA测序分析证实重组质粒载体pcDNA3.1-HNP-1构建正确。 结论:成功构建HNP-1基因的真核表达载体,为进一步在真核细胞中进行其基因表达,构建含HNP-1基因的羊乳腺反应器奠定基础。
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