目的:测定毕赤酵母GS115表达的重症肌无力单链抗体A7的一般特性,确定其分子量,以及与大鼠肋间肌乙酰胆碱受体的结合特异性。方法:将携带有重组基因表达载体的毕赤酵母GS115复苏后,利用抗生素G-418筛选高拷贝重组子,用YPD培养基传代培养,再经BMGY、BMMY表达培养基培养3天,每24小时添加100%甲醇使甲醇终浓度为1%诱导表达。培养基上清液室温经14 000 g离心后,利用斑点杂交试验初步判定上清液中的目的蛋白;采用十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白印迹试验,检测已经转化至毕赤酵母GS115中的重症肌无力重组载体pPIC9K-ScFvA7表达的单链抗体A7蛋白的分子量,应用间接免疫荧光技术确定表达蛋白与大鼠肋间肌乙酰胆碱受体的亲和性。结果:毕赤酵母GS115培养上清液中有目的蛋白的表达,分子量约为44 KD,间接免疫荧光试验显示在大鼠肋间肌细胞间有荧光出现。结论:单链抗体A7已经成功地在毕赤酵母中表达,并且能与大鼠肋间肌乙酰胆碱受体结合。
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