目的:观察熊果酸诱导的子宫内膜癌细胞HHUA凋亡并探讨其诱导凋亡的途径及机制。方法:将不同浓度的熊果酸加入到培养液中与子宫内膜癌细胞HHUA共孵育。用四甲基偶氮唑蓝还原反应（MTT法）测定熊果酸在不同浓度下对HHUA细胞的增殖抑制效应,通过丫锭橙荧光染色从形态学上观察熊果酸诱导HHUA细胞凋亡的情况,应用流式细胞仪分别测定熊果酸在不同浓度下对HHUA细胞周期的阻滞作用及诱导该细胞发生凋亡的作用,并利用RT-PCR和细胞免疫化学技术检测凋亡相关基因caspase-3和bcl-2表达的相应变化来研究熊果酸诱导HHUA细胞发生凋亡的可能机理。所得数据使用SPSS13.0统计软件分析。结果:MTT法显示熊果酸在体外对HHUA细胞有增殖抑制效应,30μmol/L的熊果酸在作用24h后即表现较强的增殖抑制作用,且呈明显的浓度和时间依赖性;在熊果酸作用后,经丫锭橙染色,荧光显微镜下观察可见细胞核皱缩,呈浓染的块状或颗粒状,发出致密的荧光,在核膜边缘可见明显的凋亡小体。流式细胞术检测显示40μmol/L UA作用24h后HHUA细胞开始出现G0/G1期阻滞,S期细胞比例降低,与对照组相比开始呈现统计学意义（P＜0.05）;随着熊果酸浓度增加和作用时间延长,细胞周期的改变愈加明显,凋亡率逐渐增高;RT-PCR显示,随药物浓度升高,caspase-3mRNA表达增强而bcl-2mRNA表达减弱。细胞免疫化学法可见,随着熊果酸浓度的升高及作用时间的延长,caspase-3蛋白的表达逐渐增强,bcl-2蛋白的表达逐渐减弱。结论:1、熊果酸在体外对HHUA细胞有一定的增殖抑制和杀伤作用。2、熊果酸在体外对HHUA细胞的作用可能与直接阻滞细胞于G0/G1期从而延长细胞周期,并诱导HHUA细胞凋亡有关。3、熊果酸诱导HHUA细胞凋亡作用与调节该细胞的caspase-3、bcl-2等基因的表达有关。
本文来源: https://www.lw50.cn/article/6fd60bfa6ab7018244c416af.html