“拯救”鹅源副粘病毒NA-1株辅助质粒的构建及鉴定
论文摘要
本研究将本实验室分离、鉴定并纯化的NA-1株鹅源副粘病毒进行了基因组RNA的提取,以GenBank收录的ZJ1株鹅源NDV全基因组核苷酸序列为模板设计5对特异性引物,通过RT-PCR方法分段扩增了NP、P和L基因核苷酸序列。本研究为“拯救”鹅源副粘病毒NA-1株而构建的3个辅助质粒pCI-NP、pCI-P和pCI-L,将其分别转染Vero细胞,经G418筛选后,通过间接免疫荧光试验、SDS-PAGE、Western blot来鉴定构建的3个辅助质粒。构建的辅助质粒为鹅源副粘病毒NA-1株的反向遗传操作以及有关功能基因组研究奠定基础。实验研究表明,副粘病毒V蛋白与毒力强弱有关。本研究模拟副粘病毒“RNA编辑”现象,在2次PCR反应过程中,扩增获得了V基因的全长cDNA。将获得的V基因亚克隆到pCI-neo中,将构建的真核表达质粒pCI-V转染Vero细胞,进行间接免疫荧光试验获得绿色荧光,说明真核表达质粒能够表达V蛋白,表达蛋白进行SDS-PAGE和Western blot试验,用全病毒高免血清进行Western blot检测,出现特异性条带。
论文目录
内容提要前言第一篇 文献综述第一章 鹅源副粘病毒基因组结构及功能的研究进展1 病毒结构及基因组2 编码蛋白及功能3 病毒的演化第二章 反向遗传操作技术在 NDV“拯救”中的应用1 NDV 的复制机制2 反向遗传操作技术在 NDV“拯救”中的研究进展第二篇 研究内容第一章 鹅源副粘病毒NA-1 株NP、P 和L 蛋白基因的克隆及遗传变异研究1 材料与方法2 结果3 讨论4 小结第二章 “拯救”鹅源副粘病毒NA-1 株辅助质粒的构建及鉴定1 材料与方法2 结果3 讨论4 小结第三章 鹅源副粘病毒NA-1 株V 蛋白基因生物学活性的研究1 材料与方法2 结果3 讨论4 小结结论参考文献中文摘要英文摘要致谢导师简介作者简介
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