目的:观察熊果酸诱导的结肠癌HT-29细胞凋亡并探讨其诱导凋亡的途径及机制。 方法:用不同浓度的熊果酸处理HT-29细胞,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测熊果酸对HT-29细胞的增殖抑制效应;采用形态学、TUNEL法检测凋亡的形态学变化;流式细胞术检测细胞周期分布及凋亡百分率;应用免疫组织化学S-P法检测凋亡相关基因caspase-9,bcl-2的表达,并用病理图像分析软件进行半定量分析。 结果:熊果酸在体外对HT-29细胞有中度增殖抑制效应。在熊果酸作用下,HT-29细胞出现显著的细胞凋亡征象。倒置显微镜原位观察见细胞间隙增宽,胞内颗粒增多,出现空泡,折光度下降,少部分细胞的细胞核固缩断裂成碎块,核膜消失,细胞膜完整且有突起。TUNEL法显示部分细胞的胞核呈棕黄色,核固缩成团、聚集成环状或碎裂,形成凋亡小体。流式细胞术检测发现细胞的G0/G1期阻滞,S期降低,在G1期之前出现sub-G1峰,凋亡率最高为11.63%。熊果酸的上述作用具有浓度和时间依赖性。在HT-29细胞凋亡过程中,凋亡相关基因caspase-9的蛋白表达主要在胞浆,有少量胞核也着色,随着UA浓度的升高及作用时间的延长,caspase-9的表达逐渐增强。bcl-2蛋白主要定位于胞浆,亦可见于胞膜和核膜,随着UA浓度的升高及作用时间的延长,bcl-2的表达逐渐减弱。 结论:熊果酸对结肠癌HT-29细胞有较强的杀伤作用,凋亡是熊果酸杀伤肿瘤细胞的机制之一,熊果酸诱导结肠癌HT-29细胞凋亡主要与促进caspase-9的活化、下调bcl-2的表达,激活细胞凋亡的线粒体途径有关。
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