单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）的表达增加是内皮功能紊乱的重要表现之一,氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）可以通过血凝素样氧化低密度脂蛋白受体（LOX-1）介导内皮细胞MCP-1的表达增加,若预先加入反义LOX-1 mRNA则可抑制上述过程,表明LOX-1在介导ox-LDL诱导的内皮细胞中MCP-1表达的信号转导途径中发挥重要作用。然而LOX-1的结构分析显示LOX-1胞内段无SH2域,且不与G蛋白偶联,却可激活酪氨酸蛋白激酶途径及G蛋白介导的PKC信号途径。因此,LOX-1如何介导信号跨膜转导的机制尚不清楚。由于多种信号分子聚集在Caveolae区,CAV-1是其信号转导中心,可介导多种受体的信号转导,且本课题组通过激光共聚焦检测到LOX-1与CAV-1在中国仓鼠卵巢细胞（CHO）上共定位,由此我们推测,CAV-1可能协助LOX-1介导ox-LDL诱导内皮细胞MCP-1的表达增加。本实验采用激光共聚焦技术,检测到培养的人脐静脉内皮细胞中LOX-1与CAV-1共定位。采用RT-PCR和Western blot检测cav-1 mRNA及蛋白水平,以此筛选出一对有效的特异性cav-1 siRNA。在上述基础上,将培养的人脐静脉内皮细胞分为以下三组:空白对照组（正常培养基）,ox-LDL刺激组（未转染特异性cav-1 siRNA）及cav-1 siRNA组（转染体外化学合成的特异性cav-1 siRNA24 h后ox-LDL刺激24 h）,采用RT-PCR和ELISA方法检测MCP-1 mRNA及蛋白水平的变化。结果发现与空白对照组相比,ox-LDL刺激组MCP-1的mRNA和蛋白表达量显著增加（P<0.05）;而cav-1 siRNA组可显著降低ox-LDL诱导的MCP-1的表达量（P<0.05）。我们的结果表明有效抑制CAV-1的表达可以下调ox-LDL诱导的内皮细胞MCP-1的表达,提示CAV-1在ox-LDL诱导内皮功能紊乱的信号传递途径中可能发挥重要作用。我们将进一步采用突变体构建、FRET等技术证实CAV-1在LOX-1信号传递中的介导作用。
本文来源: https://www.lw50.cn/article/7b9820bbb83ee3fee747ac99.html