亨得拉和尼帕病毒结构蛋白的表达及抗原表位研究

论文摘要

为有效防治亨得拉病毒(Hendra virus HeV)和尼帕病毒(Nipah virus NiV)在我国的发生和流行,本研究首先利用原核表达系统成功地表达HeV N、NiV N基因以及NiV G一段主要抗原区基因GC,并证实了两种N蛋白的主要抗原区位于C末端约200aa区域。在杆状病毒表达系统中,实现对两种病毒的N基因的分泌性表达,通过免疫学方法证实了原核和杆状病毒表达系统所表达的重组蛋白均可以作为病毒血清抗体检测的候选抗原,提出了两种病毒血清抗体的IFA检测方法;以原核系统表达的两种病毒的N蛋白免疫小鼠,通过杆状病毒表达的两种病毒的N蛋白作为检测抗原,利用IFA技术成功地筛选到了三株针对HeV N和两株针对NiV N的单克隆抗体,并对单抗的特性进行了鉴定,证实可用此法制备有鉴别诊断意义的单抗。在此基础上,利用随机12肽库技术对所制备的单抗所针对的抗原表位进行了初步研究,发现了NiV N蛋白上两个线性表位(15～23aa和443～451aa),以及两个HeV N蛋白上的模拟抗原表位。

论文目录

前言

第一篇文献综述

第一章 Hendra 病毒病和Nipah 病毒病的研究进展

第二章蝙蝠—人兽共患病病毒的一种重要自然宿主动物

第二篇研究内容

第一章 HeV N 基因和NiV N、G 基因的原核表达及反应原性鉴定

1 材料与方法

2 结果

2.1 HeV N 基因和NiV N、NiV G 基因的原核表达结果

2.2 NiV G 基因的分段表达结果

2.3 HeV N 和NiV N 蛋白主要抗原表位区的鉴定

3 讨论

4 小结

第二章 HeV N 基因和NiV N、G 基因在杆状病毒表达系统中的分泌表达及反应原性鉴定

1 材料与方法

2 结果

2.1 目的基因的克隆与转移载体的构建

2.2 重组Bacmid 的提取及鉴定结果

2.3 细胞转染与重组病毒的获得

2.4 重组蛋白的表达与纯化

2.5 重组N 蛋白的反应原性鉴定

2.6 间接免疫荧光（IFA）结果

3 讨论

4 小结

第三章抗HeV 和NiV N 蛋白单克隆抗体的制备及特性鉴定

1 材料与方法

2 结果

2.1 小鼠的免疫与抗体检测

2.2 免疫小鼠血清与表达重组N蛋白的sf9细胞单层反应的IFA检测结果

2.3 细胞融合及单抗的筛选结果

2.4 单抗的特性鉴定

3 讨论

4 小结

第四章利用随机12 肽库对 HeV 和 NiV N 蛋白抗原表位的研究

1 材料与方法

2 结果

2.1 单抗抗原表位的初步分析

2.2 单抗腹水的制备、纯化与检测结果

2.3 筛选效率

2.4 竞争抑制 ELISA 实验和噬菌体测序结果

2.5 核心序列分析及同源性比较结果

2.6 富集的噬菌体对单抗间接免疫荧光反应的抑制作用

3 讨论

4 小结

结论

参考文献

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致谢

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