目的:探讨氧化应激（oxidative stress）对胰岛β细胞胰岛素和C肽分泌功能的影响,并初步探讨其可能机制。方法:体外低糖培养RIN胰岛β细胞,以葡萄糖/葡萄糖氧化酶（glucose/glucose oxidase, G/GO）为过氧化氢（hydrogen dioxide, H2O2）产生体系,作用于培养细胞,摸拟体内氧化应激水平。将细胞分为六组,A组为对照组,B、C、D、E、F组分别加入终浓度为2mU/ml、5mU/ml、10mU/ml、20mU/ml、20mU/ml的GO,并在F组加入终浓度为200U/ml的过氧化氢酶（hydrogen peroxidase,CAT）,以DCFH-DA为细胞内H2O2荧光探针,以流式细胞术检测细胞内H2O2,以RT-PCR方法检测不同浓度G/GO体系作用下细胞内胰腺十二指肠同源异型盒（pancreas duodenum homeobox factor-1,PDX-1）的mRNA表达,并用化学发光法和放射免疫法检测不同浓度G/GO体系作用下上清液的胰岛素和C肽浓度。结果:1.B、C、D、E四组,随着加入G/GO体系中GO浓度的升高,细胞内产生的H2O2逐渐升高。2.随着H2O2生成的增多,B、C、D、E四组细胞内PDX-1的mRNA的表达逐步减少,加入CAT清除H2O2,则细胞内PDX-1的mRNA的表达又明显升高。3.随着H2O2生成的增多,胰岛β细胞分泌的胰岛素及C肽量也逐渐减少。加入CAT清除H2O2后则可部分逆转这一趋势。4.对各组细胞内H2O2的生成同PDX-1的表达进行相关性分析,再对细胞内PDX-1的mRNA的表达程度和胰岛素、C肽的分泌量进行相关性分析,发现H2O2的生成同PDX-1mRNA的表达成负相关,而PDX-1的mRNA的表达则同胰岛素、C肽的分泌呈正相关。结论:氧化应激可减少胰岛β细胞内的PDX-1的mRNA的表达,损害胰岛β细胞功能,从而减少胰岛β细胞胰岛素和C肽的分泌。而通过降低氧化应激水平则可部分恢复胰岛β细胞的功能。
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