目的:克隆泡球蚴18(Em18)抗原基因,获得高效表达、有生物活性的Em18重组蛋白,对其用于两型包虫病的免疫诊断特性进行研究。方法:DNAman软件设计引物。分别经PCR筛选,从已构建的新疆株泡球蚴cDNA文库中克隆出Em18抗原基因;及Trizol试剂提取泡球蚴原头节总RNA,RT-PCR反转录克隆出Em18抗原基因,并构建pMD18-T/Em18质粒,测序确定序列。构建pET41a-Em18原核表达质粒,测序鉴定插入序列正确性。IPTG诱导表达rEm18-GST重组蛋白和GST重组蛋白,谷光甘肽-Sepharose 4B亲合层析柱纯化,SDS-PAGE法和Western Blot法分析鉴定。ELISA法及Western Blot法检测523份血清(其中59份AE病人血清,240份CE病人血清),确定Em18重组蛋白对于两型包虫病的免疫诊断特性。结果:测序显示Em18基因长度为486bp,编码161个氨基酸,为一新序列,被GenBank收录(AY513691)。成功构建了pET41a-Em18原核表达质粒,经IPTG诱导,SDS-PAGE检测表明rEm18-GST重组蛋白得到成功表达,在相对分子量(KDa)为50处有表达条带;Western Blot分析显示rEm18-GST重组蛋白能被泡型棘球蚴病人阳性血清识别,具有良好的抗原性。523份血清经rEm18-GST重组蛋白检测,ELISA法显示其敏感性为91.52%,特异性为94.61%;Western Blot法检测显示敏感性为93.22%,特异性为94.82%。结论:成功克隆Em18抗原基因,表达的rEm18-GST重组蛋白对两型包虫病具有较高的免疫鉴别特性和免疫诊断价值,有望
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