目的观察粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子（granulocyte-macrophagecolony-stimulating factor,GM-CSF）对真菌性角膜炎病理改变的影响并探讨其可能的作用机制。方法建立小鼠茄病镰刀菌、烟曲霉菌性角膜炎动物模型,各分为两组:其中一组结膜下注射GM-CSF;对照组分为单纯GM-CSF注射组与正常角膜组。角膜接种真菌菌液后第1、3、5、8d,观察角膜大体病理改变及组织病理学改变;感染的小鼠角膜行真菌负荷检测;RT-PCR检测角膜中TLR-2、TLR-4、TLR-9、MMP-9的mRNA表达;冰冻切片免疫组化检测角膜中TLR-2、TLR-4、TLR-9、MMP-9、TNF-a、IL-10的蛋白表达;明胶酶谱法检测角膜组织中MMP-9的表达量;ELISA法检测角膜中TNF-a和IL-10的蛋白表达量。结果不论是茄病镰刀菌还是烟曲霉菌感染,GM-CSF未注射组的病变程度均重于GM-CSF注射组,尤其是5d后。茄病镰刀菌的菌丝在角膜内平行于基质板层纤维生长,而烟曲霉菌的菌丝垂直于角膜基质板层纤维生长。接种菌液后1～8d,茄病镰刀菌与烟曲霉菌感染的角膜匀浆后培养均见真菌菌落生长,GM-CSF未注射组的角膜真菌负荷大于GM-CSF注射组。正常角膜、单纯GM-CSF注射组与真菌感染的角膜中均发现TLR2、TLR4、TLR9、MMP-9 mRNA的表达;单纯GM-CSF注射组的表达量与正常角膜相仿,而真菌感染角膜中的表达量明显强于正常角膜与单纯GM-CSF注射组角膜。感染后1d,GM-CSF注射组TLR2、TLR4、TLR9、MMP-9mRNA的表达量强于GM-CSF未注射组,以后表达量逐渐减少,尤以GM-CSF注射组下降明显。Western-blot与免疫组化法在各组角膜中均未检测到TLR2、TLR9蛋白的阳性表达,在真菌感染的角膜中发现TLR4、MMP-9的阳性表达,其表达强弱与mRNA的表达结果基本一致。明胶酶谱法检测到MMP-9的蛋白条带,感染后1d、3d,GM-CSF未注射组MMP-9蛋白的表达量强于GM-CSF注射组,但第5d与8d,前者反而弱于后者。免疫组化与ELISA法在真菌感染的角膜内均检测到TNF-a与IL-10的蛋白表达,第3d表达量最高。结论在真菌性角膜炎的病程早期,GM-CSF可明显促进炎症细胞对真菌的吞噬能力,有利于真菌病原体的清除;其作用机制可能是通过增强TLRs（尤其是TLR4）的表达促进炎性细胞因子的分泌,进而在抗感染免疫过程中发挥了重要作用。GM-CSF并不加重MMP-9过量分泌导致的炎症性免疫损伤。合理选择给药时间与剂量是应用GM-CSF成功干预真菌性角膜炎的关键。
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