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核质重组胚基因组重序过程中TBP的动力学变化研究

论文摘要

核质重组胚在发生正确的后生重序后可以重新获得发育的潜能。体细胞特有的后生修饰标记在这一重序过程中被去除。本实验以表达EGFP-TBP的NIH3T3细胞为供体,去核MⅡ期小鼠卵母细胞为受体,构造核质重组胚,研究了TBP在重组胚核后生重序过程中的动力学变化,结果表明: 1.间接免疫荧光试验发现,TBP集中分布于NIH3T3细胞间期细胞核中,但在中期染色体未见TBP免疫荧光。然而,采用EGFP-TBP表达质粒转染NIH3T3细胞发现,TBP-GFP融合蛋白不仅集中在间期细胞核中,而且也存在于中期染色体上;虽然中期染色体上的荧光强度只有间期核的16%,但可见TBP显著地残留在浓缩的中期染色体上。 2.在卵母细胞减数分裂过程中,间接免疫荧光试验在GV期卵子的细胞核中检测到TBP的集中分布,但在MⅠ、MⅡ期的染色体上未能检测到TBP荧光。 3.表达EGFP-TBP融合蛋白的NIH3T3细胞作为细胞核供体用于核移植,在与去核卵母细胞融合2小时后,体细胞核凝缩成染色体,但与有丝分裂中期不同,浓缩的染色体上未见EGFP荧光,TBP从染色体上脱落。 总之,TBP在有丝分裂中期染色体上的残留可能是分化细胞特有的细胞记忆标记;这一标记在核质重组胚的核重序过程中被去除。

论文目录

  • 引言
  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 第一章 文献综述
  • 1 哺乳动物体细胞核移植的研究进展
  • 2 TBP的研究进展
  • 3 小鼠卵母细胞减数分裂的一般过程
  • 第二章 实验研究
  • 1 材料与方法
  • 2 验方法
  • 3 结果与分析
  • 3.1 pEGFP-TBP质粒的检测
  • 3.2 TBP在有丝分裂和减数分裂过程中的分布及动力学变化
  • 3.3 TBP在核质重组胚基因组重序过程中的动力学变化
  • 4 讨论
  • 4.1 TBP在细胞核内的定位
  • 4.2 TBP在有丝分裂中期染色体的残留
  • 4.3 TBP在小鼠卵母细胞减数分裂过中的动力学变化
  • 4.4 核质重组胚基因组后生重序过程中TBP的去除
  • 结论
  • 参考文献
  • 附录
  • 致谢
  • 相关论文文献

    本文来源: https://www.lw50.cn/article/890374e67900471a133afbbf.html