血友病B是一种FIX基因缺陷所致的出血性疾病。虽然通过肌肉注射、门静脉或肝动脉灌注重组腺相关病毒载体等方法，在动物模型上取得长期纠正出血症状的疗效，但是以上给药方式均为有创性。而以肠上皮细胞为靶细胞，通过灌肠给药，则可避免有创性。本实验室通过结肠灌注rAAV2／hFIX载体对血友病B小鼠进行基因治疗实验，已经建立了无创给药的临床试验基础。为了检测通过结肠灌注rAAV2／hFIX载体治疗血友病B的有效性和安全性，我们选择了两位血友病B患者，在纤维结肠镜引导下结肠灌注rAAV2／hFIX载体，观察其临床症状和体征变化，留取患者全血、血浆、唾液、尿液。采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测患者血浆和粪便中抗AAV2抗体以及FIX抗原；凝血活性一期法检测FIX活性；改进型Bethesda法检测血浆中的中和抑制性抗体（抗FIX抗体）；采用PCR技术检测rAAV2／hFIX载体在体液中的分布情况。两例患者结肠灌注剂量分别为3×1012vg／kg，8×1012vg／kg，在灌注后的一个月中，均未出现胃肠道及全身不适症状和异常体征。血浆中的FIX抗原最高浓度分别达6μg／ml和4.69μg／ml，其活性分别为2.27％和2.63％，可维持一周左右。结肠灌注rAAV2／hFIX载体后，两位患者体内均未检测到抗FIX抗体升高。在尿液、唾液、血液中均未检测到rAAV2／hFIX载体基因。但是抗AAV2抗体相对浓度随灌注剂量增加而增加，在接受高剂量灌注的患者体内可以检测到高浓度的抗AAV2抗体，在24天达到高峰，其相对浓度为治疗前的39.5倍。综上所述，结肠灌注途径基因治疗血友病B在上述剂量下是安全的，患者体内可表达具有凝血活性的FIX。
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