近30年来,随着组织工程技术的发展,已开发出多种真皮替代物,与自体的各种厚度的移植皮片相比,目前的各种真皮替代物均缺乏血管丛结构,其血管化速度远不及自体断层皮片,这是目前各种组织工程化皮肤移植成功率明显低于自体断层皮片的重要原因之一。血管生成素是迄今为止唯一一个基于其促进血管新生能力而被发现和分离纯化的促血管生成因子,其促进血管生成能力非常强,将血管生成素引入到人工真皮替代物中,用控制释放的方法来促进其血管化,有望解决真皮替代物移植成功率差的问题。本研究用冷冻-冻干法制备了胶原/壳聚糖多孔支架,并用1-乙基-3-（二甲基胺丙基）-碳化二亚胺（EDC）和N-羟基丁二酰亚胺（NHS）对其交联,同时进行肝素接枝,利用血管生成素与肝素的亲和性,将血管生成素引入到肝素化胶原/壳聚糖多孔支架中。研究中考察了肝素化胶原/壳聚糖多孔支架的微观结构、吸水率及体外酶解降解率,用放射标记技术研究肝素化对真皮支架结合血管生成素的影响,并进一步用放射标记技术和酶联免疫吸附法（ELISA）考察了血管生成素的体外释放行为。应用兔耳背皮下埋植模型对复合血管生成素的肝素化胶原/壳聚糖多孔支架的体内血管化情况进行了研究,并进一步用大鼠全层皮肤缺损模型进行一步法复合移植,观察了移植皮片成活情况、皮片收缩情况、皮片组织学变化、移植物血管化情况及真皮支架的组织反应性,以验证复合血管生成素的肝素化胶原/壳聚糖多孔支架作为人工真皮替代物应用的可能性。结果表明,肝素化胶原/壳聚糖多孔支架具有合适的孔径和三维多孔结构,并具有较高的吸水率和较理想的酶解稳定性;肝素化胶原/壳聚糖多孔支架具有较高的血管生成素结合能力,并能控释血管生成素,体内埋植研究表明血管生成素能显著加快、增强支架的血管化;一步法复合移植中证实复合血管生成素的胶原/壳聚糖多孔支架具有低抗原性、快速血管化能力和真皮模板样作用,其中快速血管化是移植成功的关键。总之,本研究构建的复合血管生成素的胶原/壳聚糖多孔支架有希望成为良好的真皮替代物,具有潜在的临床开发应用价值。
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