目的:体外观察酮缬氨酸钙、酮异亮氨酸钙和消旋羟蛋氨酸钙对人肾系膜细胞的影响。方法:10mM酮缬氨酸钙、酮异亮氨酸钙和消旋羟蛋氨酸钙对HMC细胞干预,采用MTT方法检测干预后对细胞增殖的影响,生化方法检测干预后LDH的变化,免疫组化检测AT1R的表达改变,ELISA方法检测干预后TGF-β1的变化,流式检测干预后细胞周期的改变及凋亡。结果:10mM消旋羟蛋氨酸钙、酮缬氨酸钙、酮异亮氨酸钙干预HMC细胞,细胞出现生长增殖抑制,并且细胞培养上清中LDH含量没有增加,DMSO对照组与酮异亮氨酸钙组和三种药物共同干预组具有统计学差异,p<0.05,DMSO对照组与其它各实验组之间并无统计学差异,p>0.05。消旋羟蛋氨酸钙、酮缬氨酸钙、酮异亮氨酸钙干预后HMC细胞AT1R表达较阴性对照组和DMSO组增加,而且,两两组合干预后HMC细胞AT1R表达较单一药物干预未见明显增加,三种药物共同干预后HMC细胞AT1R表达较单一药物干预有明显增加。各实验组TGF-β1的含量较DMSO对照组增加。不论是单一药物干预、两两组合及三种药物共同干预,TGF-β1的含量均较对照组增加,P<0.01,而且两两药物组合比单一药物TGF-β1的含量升高,三种药物共同干预组TGF-β1的含量升高更加明显。为了进一步探询药物干预后细胞增殖抑制的可能机制,我们还进行了细胞流式分析,结果发现,不同药物干预后HMC细胞均出现了细胞周期G1期阻滞,同时还观测到了细胞凋亡现象。有意思的是,单一药物干预与DMSO对照细胞凋亡率无统计学差异,当两种药物共同作用后,细胞凋亡率较DMSO对照组增加,当使用三种药物共同干预时,细胞凋亡率(18.76±1.02)较DMSO对照组(1.09±0.33)明显增加。结论:10mM的酮缬氨酸钙、酮异亮氨酸钙和消旋羟蛋氨酸钙可以增加AT1R在HMC细胞的表达,诱导TGF-β1的表达增加;同时诱导HMC细胞细胞周期G1阻滞并伴随细胞凋亡。
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