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Halomonas sp. SD-01菌株的分离鉴定及其所产胞外低温碱性蛋白酶的研究

论文摘要

从我国内蒙古查干诺尔盐湖泥土样品中分离得到一株产低温碱性蛋白酶的适冷菌,通过对其进行的包括形态,生理生化特性以及16srDNA序列的研究,初步确定为halomonas属的成员,并命名为Halomonas sp. SD-01。研究表明,该菌株为杆状,革兰氏阴性,周生鞭毛,有芽孢,菌体形状呈杆状,富集培养基上的菌落呈黄色。对该株菌的生长的适冷性和它产生的蛋白酶的耐低温的特性的研究结果表明:该菌株在15℃左右生长速率最高,在10℃左右酶的合成速率最高;该菌株所产蛋白酶催化酪蛋白水解的最适温度为30℃左右,最适pH为10.0左右,该蛋白酶低于50℃时稳定。故Halomonas sp. SD-01为一株适冷菌,所产蛋白酶为低温碱性蛋白酶。对这株菌产低温蛋白酶的发酵条件的研究结果表明,该菌株产生低温碱性蛋白酶的最适碳源为0.5%葡萄糖,最适氮源为酵母粉,最适盐度为10%,最适产酶时间为140h。在此基础上,采用离心、超滤、(NH4)2SO4沉淀、DEAE-SephadexA25离子交换层析、Sephorose 6B柱层析、透析以及冻干等手段,对该菌株产生的低温碱性蛋白酶进行了分离与纯化。对该低温碱性蛋白酶的性质研究表明,该酶的最适反应温度为30℃,最适反应PH为10.0,在温度≤50℃的条件下保持稳定。SDS-PAGE分析结果表明该酶分子量为69183;该酶可被EDTA不完全抑制,对1%H2O2具有一定的耐受性,对5mmol/LSDS的耐受性较差;Mn2+, Cu2+对蛋白酶有较为明显的激活作用,Ag+, Al3+, Hg2+则能抑制酶活;该酶作用于Casein的Km为1.709mg/ml;等电点电泳结果表明,该酶的PI为7.5。

论文目录

  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 目录
  • 引言
  • 一、低温微生物的简介
  • (一) 微生物的低温适应能
  • (二) 国内外的低温微生物研究现状
  • (三) 微生物低温适应机制研究
  • 二、低温微生物产生的低温酶的研究进展
  • (一) 低温菌产生的低温酶
  • (二) 低温酶的代谢合成
  • (三) 低温酶的特性
  • (四) 低温酶的结构特性
  • (五) 低温酶的基因克隆和表达
  • 三、低温蛋白酶的研究进展
  • (一) 低温蛋白酶的生理生化特征
  • (二) 低温蛋白酶的结构特征
  • (三) 低温蛋白酶的研究方法
  • (四) 低温蛋白酶的应用
  • 四、本论文的工作目的
  • 材料与方法
  • 1. 产酶菌株的筛选
  • 2. 菌株的鉴定
  • 3. 菌株所产低温碱性蛋白酶的研究
  • 实验结果
  • 1. 产酶菌株的分离筛选
  • 2. 菌株的鉴定
  • 3. 温度对菌株生长与产酶的影响
  • 4. 菌株所产低温蛋白酶的研究
  • 讨论
  • 结论
  • 参考文献
  • 致 谢
  • 相关论文文献

    本文来源: https://www.lw50.cn/article/990c0664ba3cc9f28518d50b.html