目的探讨蜗牛多糖的最佳提取条件,并研究其体外抗乙型肝炎病毒活性。方法野外采集条华蜗牛,以碱溶液浸提法提取蜗牛多糖,运用正交试验对浸提时间、温度、溶液pH值和乙醇浓度这4个提取条件进行优选。提取出的粗多糖经Sevag法除蛋白、活性炭脱色,透析法除小分子物质后得蜗牛多糖纯品,采用苯酚-硫酸比色法测定多糖含量。以HepG 2.2.15细胞株为模型,拉米夫定为阳性对照,研究蜗牛多糖体外抗HBV活性。经MTT法检测药物对HepG 2.2.15细胞的毒性后,计算药物安全浓度。将蜗牛多糖配制成10-4mg/ml、10-3mg/ml、10-2mg/ml、10-1mg/ml和1mg/ml,分别与HepG 2.2.15细胞共培养,同时设阴性对照组。9d后采用ELISA法检测细胞培养上清液中HBsAg和HBeAg水平,实时荧光定量PCR检测HBV DNA含量。根据结果计算选择指数（SI）,评价药物抗HBV效果。结果正交实验优选出的蜗牛多糖最佳提取条件为浸提时间6h、浸提温度70℃、乙醇浓度90%、溶液pH10.0。细胞毒性实验表明:蜗牛多糖的半数有毒浓度＞10mg/ml,最大无毒浓度为1mg/ml,提示蜗牛多糖对细胞基本无毒。ELISA检测结果表明:蜗牛多糖对HepG 2.2.15细胞分泌HBsAg和HBeAg最大抑制率分别为42.8%和52.1%。而拉米夫定对HepG 2.2.15细胞分泌HBsAg和HBeAg最大抑制率分别为61.6%和57.4%,两者相比差异有显著性（P＜0.05）。蜗牛多糖和拉米夫定对HBeAg的抑制作用强于HBsAg。实时荧光定量PCR检测结果表明:蜗牛多糖和拉米夫定对HBV DNA的复制有一定的抑制作用（P＜0.01）,蜗牛多糖的抑制效果略低于拉米夫定。结论蜗牛多糖碱性溶液浸提法较中性溶液浸提法能有效提高多糖得率。蜗牛多糖在体外能有效抑制HepG 2.2.15细胞HBsAg和HBeAg的分泌及HBV DNA的复制,虽效果略低于拉米夫定,但毒性较小,仍然具有良好的运用前景。本研究为进一步深入研究多糖类药物的生物学活性提供了实验依据,亦为筛选高效低毒抗HBV药物提供了一个新思路。
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