黄瓜4种α-半乳糖苷酶的Southern杂交及表达分析
论文摘要
黄瓜韧皮部中的碳水化合物主要以水苏糖的形式进行运输,但其果肉中只含有蔗糖、葡萄糖和果糖,黄瓜体内水苏糖生物分解的第一个水解步骤由α-半乳糖苷酶催化完成。为了研究黄瓜体内水苏糖卸出的具体机制,本实验室前期已经克隆了2种酸性α-半乳糖苷酶基因和2种碱性α-半乳糖苷酶基因的cDNA全长序列。为了进一步研究这些酶在黄瓜水苏糖卸出过程的具体作用,本实验在Southern杂交探明各个基因在黄瓜基因组中拷贝数的基础上,一方面测定了黄瓜果实在不同发育阶段和昼夜周期中的生长速度,另一方面通过Northern杂交检测了相应时期各种酶mRNA的表达量,并研究了两者之间的相关性。所得结果如下:1黄瓜2种酸性α-半乳糖苷酶基因和碱性α-半乳糖苷酶Ⅰ基因在黄瓜基因组中均以单拷贝形式存在,而碱性α-半乳糖苷酶Ⅱ基因则以低拷贝的形式存在。2经Northern杂交分析4种α-半乳糖苷酶在果实发育的各时期的昼夜周期中的表达量与果实生长速度之间的关系,表明2种酸性α-半乳糖苷酶与黄瓜水苏糖卸载无关,碱性α-半乳糖苷酶Ⅱ可能在黄瓜水苏糖卸出过程中发挥重要作用。
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中文摘要英文摘要引言第一章 文献综述1. 高通量表达分析方法1.1 cDNA 微阵列1.2 代表性差异分析1.3 基因表达系列分析1.4 表达序列标签2. 低通量表达分析方法2.1 Northern 杂交2.2 RNase 保护试验2.3 RT-PCR第二章 Southern 杂交分析黄瓜α-半乳糖苷酶基因2.1 材料与方法2.1.1 材料2.1.2 方法：Southern 杂交2.2 结果与分析2.2.1 黄瓜基因组DNA 的检测2.2.2 制备用于Southern 杂交地高辛（DIG）标记DNA 探针2.2.3 Southern 杂交分析第三章 Northern 杂交分析黄瓜α-半乳糖苷酶基因3.1 材料与方法3.1.1 材料3.1.2 方法：Northern 杂交3.2 结果与分析3.2.1 黄瓜总RNA 提取、完整性检测3.2.2 制备用于Northern 杂交地高辛（DIG）标记DNA 探针3.2.3 黄瓜果实不同生长发育期及昼夜周期中的生长模式3.2.4 Northern 杂交分析不同碳源培养基中4 种黄瓜α-半乳糖苷酶基因的表达3.2.5 Northern 杂交分析花后不同天数黄瓜果柄和果实中各种 α-半乳糖苷酶基因的表达3.2.6 Northern 杂交分析昼夜周期中黄瓜果柄和果实中各种α-半乳糖苷酶基因的表达3.3 讨论结论参考文献致谢
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