目的：观察小檗碱对氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的内皮细胞的损伤是否具有保护作用,并初步探讨其可能的作用机制。方法：对冻存的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）株CRL1730进行复苏与传代,细胞用含15%新生牛血清的DMEM培养基,置于37℃、5%CO2培养箱中培养。实验分为5组：对照组、模型组（仅300mg/L ox-LDL处理组）、小檗碱预处理组（经25、50、100μmol/L小檗碱分别预处理组）。将细胞均匀一致接种后待细胞贴壁良好密度达75%时开始实验,对照组和模型组用正常培养基培养4h,小檗碱预处理组用含不同浓度小檗碱的培养基培养4h,然后除对照组外其余四组均换成300mg/L的ox-LDL继续培养24h。倒置相差显微镜观察细胞形态；MTT法检测细胞生存率；收集细胞培养液用硝酸还原酶法和放射免疫法分别检测一氧化氮（NO）和内皮素-1（ET-1）含量；收集细胞用RT-PCR法和western-blot法分别检测细胞中内皮型一氧化氮合酶（eNOS） mRNA和eNOS蛋白的表达水平。结果：与对照组相比,模型组细胞明显皱缩变圆,间隙增大,胞浆内见较多颗粒和空泡；细胞生存率明显受到抑制（P<0.01）；NO含量明显降低（P<0.01）；ET-1含量明显增加（P<0.01）; eNOSmRNA和蛋白的表达水平均明显减少（P<0.01）。与模型组相比,不同浓度的小檗碱预处理组,大多数细胞呈正常形态,间隙正常,少数皱缩变圆；细胞生存率三组均明显增加（P<0.05）；NO含量均增加（P<0.05）；ET-1含量均降低（P<0.05）；25μmol/L和50μmol/L小檗碱预处理组eNOSmRNA和蛋白的表达水平明显上调（P<0.05）,而100μmol/L小檗碱预处理组eNOSmRNA和蛋白的表达水平与模型组比较无差异（P>0.05）。不同浓度小檗碱预处理组之间相比,随着小檗碱预处理浓度的增加细胞生存率逐渐降低（P<0.05）；NO含量逐渐减少（P<0.05）；ET-1含量逐渐增加（P<0.05）:eNOSmRNA和eNOS蛋白的表达水平逐渐降低（P<0.05）。结论：300mg／L的ox-LDL能够明显抑制甚至杀死内皮细胞,能够明显上调内皮细胞分泌ET-1水平,下调NO及eNOSmRNA、eNOS蛋白表达水平。一定浓度范围内的小檗碱能够抑制ox-LDL对内皮细胞的损伤,对内皮细胞具有明显的保护作用,这种保护作用机制之一可能是小檗碱抑制ox-LDL引起的内皮细胞eNOSmRNA.eNOS蛋白低表达,并提高内皮细胞生存率,调节内皮细胞合成和释放NO/ET-1,保护内皮功能。
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