目的:1.建立RTFQ-PCR、Western blotting、免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)检测RAGE表达的方法。2.分别检测RAGE在食管癌和肺癌及其相应远端正常组织中的表达。3.比较RAGE表达水平与食管癌和肺癌临床病理因素的关系,以期探讨其在肿瘤发生发展中的作用,并为今后研究RAGE基因与食管癌和肺癌的发病机制、诊断和治疗奠定基础。方法:1. RTFQ-PCR和Western blotting:采用基于SYBR GreenⅠ染料的RTFQ-PCR方法检测24例肿瘤组织(12例食管癌,12例肺癌)及其相应远端正常组织RAGE mRNA的表达,表达水平以RAGE mRNA和内参18S rRNA浓度的对数比值表示;同时运用Western blotting方法检测上述标本RAGE蛋白的表达,测定各条带吸光度值并取其与β-actin比值为相对吸光度分析表达量,数据使用SPSS 11.5统计学软件进行配对t检验分析。2.另取29例食管癌、32例肺癌及相应远端正常组织,采用免疫组化法检测RAGE表达,应用SPSS 11.5统计学软件,采用χ2检验或Fisher确切概率法进行统计分析,判断RAGE表达与各病理指标的相互关系。结果:1.成功建立RTFQ-PCR、Western blotting和免疫组化检测RAGE表达的方法。2.食管癌及相应远端正常组织RAGE mRNA与18S rRNA浓度的对数比值( x±s)分别为0.638±0.068和0.334±0.329(P<0.05),提示食管癌组织RAGE表达上调;肺癌组织中RAGE mRNA表达量(0.627±0.224)低于其相应远端正常组织(0.863±0.151)(P<0.05);RAGE蛋白在食管癌组织中高表达(0.870±0.095 vs. 0.741±0.076)而在肺癌组织中低表达(0.868±0.039 vs. 0.937±0.011),差异具统计学意义。3.免疫组化结果显示RAGE定位于细胞膜和胞质。RAGE在食管癌组织中阳性率为100.0%(29/29),高于远端正常组织31.8%(7/22)(P=0.000),当癌侵及肌层及外层后其表达高于局限在黏膜及黏膜下层者(P=0.000);肺癌组织中阳性率为75.0%(24/32),显著低于远端正常组织100.0%(28/28)(P=0.000),异常表达与患者年龄、肿瘤TNM分期相关(P<0.050),与肿瘤分化程度、组织分型和淋巴结转移等临床病理因素无关。结论:1.通过该实验成功建立检测RAGE的RTFQ-PCR、Western blotting和免疫组化方法。2.食管癌组织中RAGE含量高于相应远端正常组织并与肿瘤浸润深度呈正相关;RAGE在肺癌组织中低表达并与患者年龄、肿瘤TNM分期密切相关。本研究为探讨RAGE在食管癌和肺癌发病机制中作用及其在临床诊断和治疗上的应用提供必要实验基础。
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