本文通过体外牛肝细胞和脂肪细胞的原代培养实验,运用荧光定量逆转录PCR（RT-PCR）和比色法等实验方法,检测了神经肽Y（neuropeptide Y,NPY）对两种细胞中肝糖异生和脂肪动员的关键酶和关键受体表达及活性,同时观察了NPY对两种细胞的胰岛素反应性的影响。探讨了NPY对奶牛代谢的调控作用。最后通过分子生物学技术重组了NPY和NPY-PTD两种蛋白,为深入研究NPY在体内的作用打下了基础。肝细胞添加外源性NPY试验表明:①NPY对肝细胞中的PEPCKmRNA、PCmRNA的水平及PC、PEPCK的活性具有促进作用,且具有一定的剂量依赖性和时间依赖性;②NPY提高肝细胞PPARs mRNA的水平,降低GLUTs mRNA的水平。脂肪细胞添加外源性NPY试验表明:①NPY降低脂肪细胞HSL mRNA的水平和HSL的活性;②NPY上调ACC和LEP的表达;③NPY提高脂肪细胞PPARs mRNA的水平,降低GLUTs mRNA的水平。胰岛素反应性试验表明,同时添外源性NPY和胰岛素:①NPY提高了脂肪细胞对胰岛素的反应性;②NPY降低了肝细胞对胰岛素的反应性。上述结果说明:NPY可减少脂肪动员,增加肝脏糖异生的能力。利用分子生物学实技术,克隆了NPY基因和NPY-PTD基因,构建了NPY基因和NPY-PTD基因原核表达载体,并在大肠杆菌表达系统系统中进行了表达;同时对表达产物进行了生物学活性检测,证明具有部分的生物学活性,为进一步在研究NPY在体内的作用打下了基础。
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