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Ang2-siRNA慢病毒载体干预裸鼠移植性恶性黑色素瘤的研究

论文摘要

目的:构建人恶性黑色素瘤裸鼠移植瘤模型,利用Ang2-siRNA慢病毒载体介导的RNA干扰作用,沉默Ang2基因在裸鼠移植瘤中的表达,研究在体内Ang2-siRNA慢病毒对移植瘤中Ang2基因的影响,并检测移植瘤微血管密度,肿瘤的增殖情况和体积,评价及初步明确Ang2表达水平、微血管密度与肿瘤增殖之间的关系,为肿瘤的基因治疗提供一定的基础实验研究依据。方法:1、将15雄性裸鼠随机分成空白组(PBScontrolgroup)、空载组(Vectorcontrolgroup)、实验组(RNAigroup)3组,每组5只。2、正常培养、传代A375细胞,制成单细胞悬液,调整细胞密度至约为5×107个/ml。3、在裸鼠右腋皮下,用100μl微量进样器接种制备好的A375单细胞悬液,100μl/只,建立人恶性黑色素瘤裸鼠移植瘤模型。4、空白组、空载组、实验组3组裸鼠皮下移植瘤分别多点注射PBS、pNL-EGFP-Vector和pNL-EGFP-Ang2-siRNA慢病毒液,200μl/只,并于腹腔内加强注射同种溶液500μl/只,进行干扰试验研究。5、观察并记录裸鼠移植瘤增殖情况和体积,统计、分析各组之间体积差异,并绘制肿瘤生长曲线。6、用实时荧光定量RT-PCR法检测移植瘤中Ang2基因的相对表达量,统计分析各组之间Ang2基因表达水平的差异和肿瘤增殖程度的关系。7、用免疫组织化学法检测移植瘤的微血管密度,统计分析各组之间差异及其与肿瘤增殖程度的关系。结果:1、成功建立了人恶性黑色素瘤裸鼠移植瘤模型。2、实验组移植瘤体积显著小于空白组和空载组,有统计学意义(P<0.01),空白组和空载组移植瘤体积之间差异无统计学意义(P>0.05)。3、实验组移植瘤Ang2基因相对表达水平显著低于空白组和空载组,有统计学意义(P<0.01),空白组和空载组Ang2基因相对表达水平之间差异无统计学意义(P>0.05)。4、实验组微血管密度显著低于空白组和空载组,有统计学意义(P<0.01),空白组和空载组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:利用Ang2-siRNA慢病毒载体介导的RNA干扰作用,能够成功降低人恶性黑色素瘤裸鼠移植瘤中Ang2基因的表达水平,减少移植瘤中微血管的生成,从而抑制肿瘤的生长、增殖。

论文目录

  • 英文缩略词表
  • 摘要
  • Abstract
  • 前言
  • 实验内容
  • 1、材料与试剂
  • 2、实验方法
  • 3、结果与分析
  • 4、讨论
  • 5、结论
  • 参考文献
  • 致谢
  • 综述
  • 综述参考文献
  • 攻读学位期间发表论文情况
  • 相关论文文献

    本文来源: https://www.lw50.cn/article/c0850a9f2cc8e4a6cd9bab8d.html