拟南芥转录因子TDF1在花药发育过程中分子调控机理的研究

论文摘要

在拟南芥花药发育过程中,MYB家族转录因子TDF1在调控绒毡层发育及后期功能上起关键的作用。在花药发育早期,该转录因子特异性地在绒毡层,花粉母细胞和小孢子中高效表达。该基因突变体花药的体细胞早期出现空泡化现象,小孢子提前降解,导致不育。本研究利用PCR方法扩增TDF1基因并克隆到原核表达载体pET-32a。将表达载体TDF1-pET32a转入大肠杆菌BL21（DE3）,用IPTG成功诱导表达了分子量约为56KD的TDF1融合蛋白。该融合蛋白主要以包涵体形式存在,分离出包涵体后进行可溶性处理作为抗原免疫家兔。制备出的多克隆抗血清经ELISA测定效价为1：2560,Western blot检测表明该抗血清与TDF1融合蛋白识别良好。TDF1抗体的制备有助于进一步从生化水平上研究TDF1在花药发育中的功能。同时,我们通过对实验室前期实验中获得的突变体芯片数据进行分析,初步预测了TDFl上下游调控的转录因子,获得的数据对后续验证实验具有指导作用。此外,我们还获得了TDF1与TAP标签融合的转基因植株,这些工作为利用CHIP技术寻找在体内被TDF1直接调控转录的基因,进一步研究TDFl相关的花药发育分子调控机理奠定了基础。

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1. 前言

1.1 转录因子

1.2 植物中的MYB家族转录因子

1.3 拟南芥中与花药发育相关的MYB转录因子

1.4 花药与花粉的发育过程

1.5 绒毡层在小孢子发育中的重要性

1.6 拟南芥绒毡层发育相关基因

1.7 绒毡层发育与功能的调控网络

1.8 本研究的背景,目的和内容

2. 材料与方法

2.1 实验材料

2.1.1 植物材料

2.1.2 质粒和菌株

2.1.3 工具酶和试剂

2.1.4 主要仪器

2.2 实验方法

3. 结果

3.1 TDF1融合蛋白表达载体的构建及鉴定

3.2 获得TDF1融合蛋白

3.2.1 TDF1融合蛋白的原核表达

3.2.2 包涵体的可溶性处理

3.3 多克隆抗体的制备与检测

3.3.1 多克隆抗体制备与效价测定

3.3.2 多克隆抗体特异性检测

3.4 TDF1上下游调控转录因子的预测

3.5 TDF1与TAP标签融合载体的构建

4. 讨论

参考文献

致谢

攻读学位期间发表的研究成果

拟南芥转录因子TDF1在花药发育过程中分子调控机理的研究

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