目的:在鸡胸骨剑突软骨中提取、纯化Ⅱ型胶原蛋白（CⅡ）并进行初步鉴定,为制备胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠模型提供原材料;制备CIA大鼠模型,从形态学、免疫学及病理组织学等多角度观察CIA大鼠模型特点;进一步阐明CIA大鼠的发病机制。方法和结果:1.Ⅱ型胶原蛋白（collagen typeⅡ,CⅡ）的提取、纯化与鉴定以鸡胸骨剑突软骨为原料,采用胃蛋白酶消化法在酸性条件下提取CⅡ;运用盐酸胍抽提,NaCl的反复盐析纯化,DEAE-52纤维树脂处理,透析除盐等方法去除蛋白多糖、CⅡ降解片段及变性产物以纯化CⅡ;采用SDS-PAGE电泳和吸收光谱分析的方法鉴定。实验结果显示,所提取的CⅡ与标准品分子量一致,最大吸收峰为226nm,证实所提取纯化的蛋白为Ⅱ型胶原。2.胶原诱导性关节炎大鼠（collagen-induced arthritis,CIA）模型的制备及评价本实验室自提CⅡ加完全弗氏佐剂（CFA）采用皮内注射的方法建立大鼠CIA模型。容积法检测大鼠足爪肿胀度并进行评分;HE染色法对关节组织作病理检查;ELISA法检测体内抗CⅡ抗体的含量;放免法检测血清细胞因子IL-1β、TNF-α含量。结果显示,CIA大鼠足爪的炎症反应强烈,关节肿胀明显;病理检查关节组织可见大量炎性细胞浸润,并伴有组织纤维化;血清中抗CⅡ抗体水平和IL-1β、TNF-α显著升高,提示胶原性关节炎大鼠模型制备成功。3.胶原诱导性关节炎大鼠部分机制的研究在CIA大鼠模型制备成功的基础上,用MTT法检测脾淋巴细胞增殖反应;RT-PCR法检测CIA大鼠脾组织调节性T细胞的特异性标志物——Foxp3及其表面的TGF-β1的表达。结果显示,CIA大鼠体内脾淋巴细胞增殖反应增强;Foxp3mRNA与TGF-β1mRNA表达均降低。结论:1.所提取纯化的蛋白为Ⅱ型胶原,该方法提纯CⅡ简单,高效。2.制备的CIA大鼠模型其临床表现、免疫学及病理学改变均与人类RA相似,模型制备成功。3.在CIA模型中,淋巴细胞增减与炎症反应的强弱有密切相关性,调节性T细胞因其功能存在缺陷,不能有效抑制效应性T淋巴细胞增殖活化,导致机体发生自身免疫反应,引起关节炎的发生。
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