肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae,S.pn）是全世界范围内引起感染和死亡的主要病原菌之一,是引起社区获得性肺炎、中耳炎和脑膜炎最常见的病原菌。一百多年来,科学家们不断探寻肺炎链球菌致病的机理,虽然揭示出许多肺炎链球菌感染的基本理论,然而到目前为止,人类对肺炎链球菌引发的疾病仍缺乏有效的预防手段。要彻底解决肺炎链球菌感染的问题,仍需深入探讨肺炎链球菌致病的分子机理。 胆碱不仅是肺炎链球菌生长所需因子,在细胞分裂、转化和自溶等生物学特性中发挥作用,还是影响多种肺炎链球菌毒力因子的重要物质,在肺炎链球菌生理代谢和发病机制中发挥着重要作用。而 licD2基因是掌控胆碱代谢的重要遗传学位点,因此该基因对肺炎链球菌毒力具有重大影响。 目的:构建 licD2 基因缺陷的肺炎链球菌菌株,探索该基因的缺陷是否影响细菌毒力。方法:采用基因克隆技术,在肺炎链球菌自杀质粒 pEVP3 中插入 licD2 基因片段。利用基因同源重组的原理,将重组自杀质粒整合到肺炎链球菌染色体中建立稳定的重组菌株。通过相对定量 RT-PCR 分析肺炎链球菌多种毒力因子表达情况,并利用动物体内试验观察 licD2 基因缺陷菌株毒力改变。结果:①构建了 pEVP3-licD2质粒,成功建立了 licD2 基因缺陷的肺炎链球菌菌株。②licD2 缺陷以后,肺炎链球菌转化能力明显下降甚至完全不能转化。③从体外培养细菌的毒力基因 mRNA 表达来看,缺陷型肺炎链球菌几种毒力因子的
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