马兜铃酸诱导小鼠淋巴瘤细胞突变机制的研究
论文摘要
马兜铃酸存在于65种以上的马兜铃科植物中,其中有许多曾用于传统中药、食品补充剂或草药疗法减肥。近年来,人们发现马兜铃酸是一种对人和动物都有致突变性的强致癌剂。在之前的研究中,我们发现马兜铃酸是一种强致突变剂,对小鼠淋巴瘤细胞有显著的细胞毒性和致突变作用。本研究中我们进一步阐明马兜铃酸(Aristolochic Acid, AA)的致突变分子机制,本试验采用“小鼠淋巴瘤细胞L5178Y/TK+/-致突变检测方法”(L5178Y/TK+/- Mouse Lymphoma Mutation Assay,MLA)来获得胸苷激酶基因(tk)突变克隆。为了检测含功能性tk基因的11号染色体(11b)上DNA断裂情况,我们挑取对照组和100μg/ml AA处理小鼠淋巴瘤L5178Y tk+/--3.7.2-细胞得到的tk基因突变克隆,提取DNA,用基于PCR的杂合性缺失(Loss of heterozygosity,LOH)的分析方法考察11号染色体上分布的tk位点和其他三个微卫星位点(D11Mit42, D11Mit29, D11Mit74)的杂合性缺失情况。从检测结果来看100μg/ml AA诱导的突变体中功能性tk基因缺失率为
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摘要ABSTRACT第一章 绪论1.1 中药安全性评价的研究背景1.2 中药毒性的认识1.2.1 中药的毒性成分1.2.2 中药致突变性的研究1.3 马兜铃酸相关研究进展简介1.3.1 马兜铃酸的基本性质1.3.2 马兜铃酸药理及临床1.3.3 马兜铃酸毒性作用1.4 遗传毒理学介绍1.4.1 遗传毒理学的产生和发展1.4.2 遗传毒理学研究内容1.4.3 常用遗传毒性检测方法和发展趋势1.5 胸苷激酶(tk)基因体外突变试验介绍1.5.1 tk 基因突变试验常用的细胞株1.5.2 tk 基因突变试验原理1.5.3 小鼠淋巴瘤细胞试验概要1.6 tk 基因突变试验分子机制的研究1.6.1 tk 基因杂合性缺失(LOH)分析1.7 小结第二章 材料与方法2.1 实验材料与仪器2.1.1 细胞株2.1.2 主要试剂2.1.3 主要仪器与耗材2.2 实验方法2.2.1 细胞培养2.2.2 小鼠淋巴瘤细胞突变试验步骤2.2.3 杂合性缺失分析实验步骤第三章 实验结果3.1 马兜铃酸I 的细胞毒性分析3.2 马兜铃酸I 的遗传毒性分析3.2.1 细胞突变频率的分析3.2.2 Tk1 位点杂合性缺失分析3.2.3 考察116 染色体的断裂情况第四章 讨论参考文献缩略语致谢攻读学位期间发表的学术论文目录
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