甘丙肽（Galanin,GAL）是一个29—30个氨基酸的酰基化神经肽。它广泛分布于中枢神经系统,参与学习记忆、神经内分泌和神经元活动等功能的调节。本文旨在通过一种特殊的胶质细胞——嗅成鞘细胞（olfactory ensheathing cells,OECs）来研究GAL及其受体（GalR1、GalR2和GalR3）的表达,并进一步探讨GAL对OECs的作用。 为此,实验分为四部分进行。第一部分,选取出生后1～3天的SD大鼠,摘取大脑嗅球,将其最外层——嗅神经层剥离下来,获得OECs培养物。运用阿糖胞苷（Ara-C）处理这些细胞培养物从而纯化出OECs,再用含牛垂体提取物（BPE）的培养液对细胞进行扩大培养。然后运用免疫组化ABC法与免疫荧光细胞化学两种方法进行鉴定。第二部分,为了检测体外培养的OECs是否表达GAL及其三种受体——GalR1、GalR2和GalR3,实验中采用免疫荧光化学的方法来检测GAL蛋白的表达。再运用RT-PCR方法来检测GAL及其三种受体mRNA的表达。第三部分,为了初步了解GAL对新生大鼠OECs的影响,首先,实验中运用MTT法来检测不同浓度的GAL及其受体激动剂（GAL1-11和GAL2-11）和拮抗剂（M35）对OECs增殖的影响。然后采用TUNEL法进一步检测GAL是否引起了细胞的凋亡。第四部分,为了进一步探讨GAL对OECs增殖影响的作用机理,我们将100nM GAL作用于OECs,采用半定量逆转录聚合酶链反应（semiquantitative RT-PCR）检测OECs中几种与神经细胞生长和存活相关的营养因子（LIF、CNTF、GDNF、NTN和BDNF）表达的变化。旨在通过这几种营养因子表达的变化,来探究GAL的相关作用机理。实验以人的甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase G3PDH）作为内参照。 实验结果: 1)经过上述分离与纯化细胞的方法,我们成功地获得OECs,细胞纯度达到90—93%,并且OECs在体外能够稳定的生长。
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