尿激酶型纤溶酶原激活系统是体内纤溶系统的重要组成部分。近年来的研究表明,尿激酶型纤溶酶原激活系统介导细胞外基质的降解,在细胞发育、分化、组织重建、排卵及肿瘤侵袭转移中具有重要作用。Kunitz型蛋白酶抑制剂,对丝氨酸蛋白酶具有广谱的抑制作用,如对胰蛋白酶、糜蛋白酶、纤溶酶、凝血酶及各种组织或血浆激肽释放酶等都有较强的抑制作用。通过构建rhuPA17-KPI pPICZαC真核表达载体,建立了重组rhuPA17-KPI毕赤酵母的高效表达体系,筛选出高效表达rhuPA17-KPI的毕赤酵母工程菌。利用80L发酵罐进行rhuPA17-KPI大规模发酵工艺的研究及纯化方法的建立,通过对发酵液的pH值、溶解氧、培养基成分、甲醇流加速度等多个影响发酵过程因素的筛选,确定了rhuPA17-KPI的最佳发酵条件及纯化方法。本研究利用uPA与KPI各自的结构与生物学活性特点,将huPA与huPAR结合起关键作用的17-34位氨基酸与KPI融合表达,并在毕赤酵母中高效表达重组rhuPA17-KPI,以uPA17为融合蛋白的靶向部分,KPI为生物活性部分,为今后研究rhuPA17-KPI在止血、炎症以及抑制肿瘤侵袭转移中高效靶向治疗的应用提供了前期实验基础。
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