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催化生物柴油生产的脂肪酶产生菌的筛选及其相关基因的研究

论文摘要

脂肪酶是在生物化工中很重要的酶类,近年来更被广泛的应用于生物柴油的研究中。酶法生产生物柴油一般采用成品酶,价格较高。从土壤中筛选产脂肪酶菌就可以得到廉价的脂肪酶,降低生物柴油成本,使之广泛应用。在酿酒厂、粮店、加油站、面粉厂等可能产生特异菌株的地点附近,采集土样20份,用含有橄榄油为唯一碳源的无机培养基中,继代5次,用以橄榄油PVA乳化液为底物的筛选培养基筛选出一株脂肪酶活力相对较高的菌株22号菌,经过菌落形态观察和扩增其16S rRNA的初步鉴定,为细菌Aranicola sp.属。以脂肪酶活力较稳定的6号菌为出发菌株,进行脂肪酶相关基因的研究,为构建基因工程菌株打下基础。提取基因组DNA,用限制性内切酶酶切成1～3 kb的DNA片段,与去磷酸化的pUC18质粒进行连接,连接产物转化大肠杆菌DH5α,得到约2万个左右拟阳性克隆,目前拟阳性克隆的筛选正在进行中。观察极性溶剂对脂肪酶活力的影响。在产酶培养基中分别加入不同剂量的甲醇、乙醚和异戊醇,产酶72小时后,检测酶活力,发现甲醇对脂肪酶活力有明显抑制作用,乙醚对脂肪酶活力有增强的作用,而异戊醇对脂肪酶活力无明显影响。

论文目录

  • 中文摘要
  • Abstract
  • 第1章 绪论
  • 1.1 研究的目的和意义
  • 1.2 脂肪酶的简介
  • 1.2.1 脂肪酶的分子结构和酶学特性
  • 1.2.2 脂肪酶的催化特性及机制
  • 1.2.3 酶活力的测定方法
  • 1.3 微生物脂肪酶的概述
  • 1.4 脂肪酶的应用
  • 1.4.1 在石油化工中的应用
  • 1.4.2 在皮革生产中的应用
  • 1.4.3 在纸浆造纸中的应用
  • 1.4.4 加酶洗涤剂
  • 1.4.5 应用于食品成分
  • 1.4.6 在医学中的应用
  • 1.4.7 合成手性化合物
  • 1.4.8 在油脂改性中的应用
  • 1.4.9 在药物和化妆品中的应用
  • 1.4.10 在生物柴油中的应用
  • 1.5 生物柴油简介及国内外发展趋势
  • 1.5.1 生物柴油的研究现状
  • 1.5.2 生物柴油的制备方法
  • 1.5.3 生物柴油的国内外发展趋势
  • 第2章 催化生物柴油生产的脂肪酶产生菌的筛选以及相关基因的研究
  • 2.1 材料
  • 2.1.1 使用的仪器
  • 2.1.2 试剂的配制
  • 2.2 方法
  • 2.2.1 产脂肪酶菌株的获得
  • 2.2.2 脂肪酶相关基因的研究
  • 2.2.3 极性溶剂对脂肪酶活力的影响
  • 2.3 结果
  • 2.3.1 菌株筛选的结果
  • 2.3.2 脂肪酶活力测定的结果
  • 2.3.3 菌种的确定
  • 2.3.4 脂肪酶基因的研究结果
  • 2.3.5 甲醇对脂肪酶活力的影响
  • 2.3.6 乙醚对脂肪酶活力的影响
  • 2.3.7 异戊醇对脂肪酶活力的影响
  • 2.4 小结
  • 第3章 讨论
  • 第4章 结论
  • 参考文献
  • 致谢

    • 相关论文文献

    本文来源: https://www.lw50.cn/article/df2efb40905352a6d441340a.html