目的:观察甲乙煎对肝癌H22模型小鼠癌细胞侵袭和转移情况的影响,并进一步探讨其作用机理,重点探讨甲乙煎对肝癌组织基质金属蛋白酶表达的影响,以更好地为临床提供客观而科学的依据。方法1动物分组清洁级雄性BALB/C小鼠75只,5—6周龄,体重18±2g,随机分为5组:病理模型对照组,西药(5-Fu)对照组,甲乙煎小、中、大剂量组,每组各15只。2复制小鼠肝癌H22淋巴道转移模型复苏后的肝癌H22瘤株,注入5-6周龄BALB/C小鼠腹腔内,待7-10天后,小鼠腹围增至最大时,抽取腹水,传代2-3次。之后,将腹围增至最大时的荷瘤小鼠,颈椎脱臼法处死,腹腔内注射无菌生理盐水5ml,再用一次性灭菌注射器抽取腹水。将收集的腹水经800转/分离心3分钟,弃上清,计数,调整细胞浓度至108/ml,于各组小鼠左后肢爪垫内侧皮下注射瘤细胞悬液0. 05mI ( 5×106个/ml)。3给药自造模第2天开始给药。病理模型对照组以生理盐水0.4 m1/只·天灌胃;西药(5-Fu)对照组以5-Fu 2mg/ml,0. 2m1/只·天腹腔注射;甲乙煎小、中、大剂量组分别以甲乙煎lg/ml、2g/ml、4g/ml,0.4 m1/只·天灌胃,每日一次,连续15天。4取材及固定实验结束后第2天,将各组小鼠颈椎脱臼法处死,称体重,取腘窝、髂动脉旁、肾门淋巴结、脾及胸腺,并称重。取各组小鼠左足爪垫皮下局部瘤组织,避开坏死和出血区,立即入4%多聚甲醛,固定12小时后,常规脱水,透明,石蜡包埋。超薄切片机切片,片厚5μm,,烘箱内烘干备用。结果1甲乙煎治疗组与模型组相比,其淋巴结指数有降低趋势,其中小剂量组有显著性差异(P<0.05);大、中剂量组可使胸腺指数明显升高(P<0.05)。西药5-Fu治疗组与病理模型对照组相比较,脾指数明显降低(P<0.01),而中药各治疗组则无此副作用(P>0.05)。2中药各治疗组可明显降低肝癌组织基质金属蛋白酶(MMP2、MMP9、TIMP2)的表达水平。结论1甲乙煎可明显降低腘窝淋巴结、髂动脉旁淋巴结和肾门淋巴结的重量,降低淋巴结指数,减轻淋巴结的转移程度,以甲乙煎小剂量组最为明显。2各治疗组可明显提高肝癌小鼠胸腺指数,以甲乙煎大剂量组最为明显;与病理模型组相比较,西药对照组明显抑制脾指数,而甲乙煎各治疗组则无此副作用。3甲乙煎可抑制肝癌组织MMP-2、MMP-9的表达水平,同时提高肝癌组织TIMP-2的表达水平,从而抑制肝癌细胞的转移,改善其预后。其作用以甲乙煎大剂量组较为明显,在一定范围内呈量效关系,即剂量增加,作用增强。
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