目的1．研制稳定的、能够表达高生物活性细胞因子的细胞基因药物。2．利用该基因药物修饰具有多分化潜能的MSCs，评价该类基因药物修饰的MSCs在烧伤创面治疗中的作用。为烧伤的治疗及并发症的防治提供新的策略；同时，也为临床难愈合创面及多器官组织的损伤修复提供新的治疗方法。方法第一部分体外分离、培养雄性Wistar大鼠MSCs，用免疫组化法检测MSC中HGF受体C—met是否表达；以不同强度Ad-GFP转染MSCs，用流式细胞仪测定转染效率，筛选出最佳转染强度，并以最佳转染强度将HGF基因体外转染MSCs；用ELISA法检测转染后MSCs的HGF表达水平；用MTr法检测Ad-HGF对MSCs增殖活性影响。第二部分体内利用目的基因修饰的MSCs对烧伤模型进行转基因干细胞移植治疗。50只雌性Wistar大鼠随机分为5组：MSCs治疗组（A组），Ad-HGF修饰MSCs治疗组（B组），Ad-GFP修饰MSCs治疗组（C组），Ad-HGF治疗组（D组），盐水对照组（E组）。复制大鼠深Ⅱ度烫伤模型，将细胞悬液、病毒悬液及生理盐水行创面下多点注射。伤后3、5、7、14、21天采集创面标本，行创口收缩率测定、HE染色、胶原VG染色和羟脯氨酸含量测定，观察创面愈合情况，并利用原位杂交、免疫组化分析创面愈合过程中是否存在植入细胞参与创面修复及HGF的表达情况。结果1．HGF受体C—met在MSCs的胞膜和胞浆中均有表达；2．转染强度MOI=100，转染效率最高；3．目的基因转染MSCs后48小时，HGF表达量达到最高峰；4．当MOI=200，对MSCs的增殖活性出现了明显抑制作用；5．伤后7、14天B组与A组、C组、D组、E组比较，创口收缩率显著增高（P＜0.01）：6．伤后3、5天各组HE染色无明显差别；7天可见B组表皮化优于其它组；伤后21天B组再生表皮明显厚于其它各组，并可见表皮钉脚下伸；7．伤后21天胶原VG染色显示，B组创面中胶原排列较其它各组整齐；8．伤后7天，B组羟脯氨酸含量与其它各组比较有显著性差异（P＜0.01）；9．原位杂交结果表明，B组雌性大鼠修复的新生皮肤中检测到雄性大鼠Sry基因表达；10．免疫组化显示，B组创面中HGF基因表达强于其它组。结论1．MSCs是一种理想的基因载体细胞，可用于HGF的基因治疗。2．随着重组腺病毒感染强度的加大，对细胞的增殖活性存在明显的抑制作用。3．Ad-HGF修饰的MSCs异体移植，对烧伤创面愈合存在促进作用，可能为烧伤创面修复提供新的治疗方法。4．Ad-HGF修饰MSCs的促愈作用优于单独使用HGF和MSC的促愈效果。
本文来源: https://www.lw50.cn/article/e2809e21ccc9a82b81cd45c5.html