利用PCR 的方法设计两条引物从肠出血性大肠杆菌O157:H7 的基因组DNA 中扩增出编码Stx1A-LHRH 的重组融合基因片段,定向克隆到表达质粒pET28a 中,构建重组表达质粒pET28a::Stx1A-LHRH,将重组质粒转化到宿主菌BL21（DE3）中。对该重组菌株用IPTG 进行诱导表达,并利用超声波裂解细菌对表达蛋白进行初步定位。SDS-PAGE 电泳检测结果表明重组菌株表达出了23.7kDa 的目的融合蛋白Stx1A-LHRH,目的蛋白为包涵体表达,经薄层扫描分析表明表达量约占菌体总蛋白的37.6%,约占细菌超声波处理后沉淀的63.4%。不同诱导时间的结果表明,在3-7h 的诱导时间内,目的蛋白的表达量没有明显变化。利用PCR的方法设计两条引物扩增出融合基因Stx1A-LHRH,定向克隆到质粒pMAL-p2x 中。将重组质粒pMAL-p2x:: Stx1A-LHRH 转化到宿主菌TB1 中,对该重组菌株用IPTG 进行诱导表达,并利用超声波裂解处理细菌。SDS-PAGE 电泳检测结果表明重组菌株表达出了66kDa 的目的融合蛋白MBP-Stx1A-LHRH,且大部分呈可溶性表达。对表达出的可溶性蛋白进行亲和层析纯化,纯化后的蛋白用factorⅩa 酶切后获得融合蛋白Stx1A-LHRH。
本文来源: https://www.lw50.cn/article/e54844ef47dbfaf9c0f45c69.html