本研究拟探索核酸检测技术在日本血吸虫感染早期检测及疗效考核中的应用。根据日本血吸虫基因设计特异性引物,采用PCR技术对日本血吸虫感染宿主的不同标本和不同种虫（日本血吸虫和曼氏血吸虫）的DNA模板进行扩增,以测定PCR的特异性,并倍比稀释虫卵和粪便的模板DNA进行扩增,以测定PCR的敏感性。应用PCR检测方法对不同感染度和不同感染期家兔血清以及感染家兔治疗前后的血清进行检测,并与免疫学方法ELISA和COPT比较,以寻找早期诊断和评价疗效的新方法。结果,从日本血吸虫的成虫、虫卵、日本血吸虫感染家兔的肝组织、粪便和外周血清中均扩增到分子量为230bp的特异性阳性条带,尤其是能在感染早期（感染后1w）即可扩增出阳性条带,比粪检法和免疫学方法早3w-6w。PCR扩增产物经测序并在基因库中匹配,证实为日本血吸虫基因中的一个片段,其同源性为98%,且与曼氏血吸虫无交叉反应。其PCR扩增敏感性检测结果表明, 0.021个虫卵干粉DNA模板和1.1个粪便虫卵DNA模板即可扩增出该特异性阳性条带,其疗效考核的实验显示,PCR检测法在日本血吸虫感染家兔经吡喹酮治疗后10w即转为阴性,而COPT法则在治疗后20w转为阴性,ELISA法显示感染家兔治疗后23w血清抗体仍维持在高水平。本研究结果表明,聚合酶链反应检测日本血吸虫DNA有较高的敏感性和特异性,尤其是首次从日本血吸虫感染宿主血清中检测出特异性DNA,并在感染的第1w即能扩增出特异性DNA阳性条带,且具有一定的疗效考核价值。PCR检测法对日本血吸虫感染早期检测及疗效考核具有潜在的应用价值。
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