目的:本课题组已证实tau蛋白过度磷酸化过程参与了神经元逃逸凋亡并发生退行性变性死亡,本研究将进一步研究tau蛋白去磷酸化过程在凋亡发生中的作用及可能机制。方法:先将人最长的野生型tau（tau441）基因稳定转染到人肾母细胞瘤细胞（HEK293）内,以建立稳定过度表达tau的细胞株:HEK293/tau;再在HEK293细胞（HEK293/wt和HEK293/tau）中瞬时转染质粒PP2A使之过度表达PP2A,转染空载体pcDNA作为对照。接着分别用不同的凋亡诱导剂staurosporine,camptothecin,H2O2处理这两种细胞。在作用6小时后,用流式细胞计量术检测细胞凋亡率;用免疫印迹的技术检测细胞内PP2A、抗凋亡因子Bcl-2、tau蛋白的表达和活性水平,并分析Bcl-2、tau蛋白磷酸化变化的关系。结果:1)过度表达PP2A使细胞可以抵抗凋亡诱导剂所诱导的细胞凋亡,同时细胞内抗凋亡因子Bcl-2的ser87位点磷酸化水平显著下降。2)在不同凋亡诱导剂的作用下:过度表达tau的HEK293/tau细胞凋亡率显著低于HEK293/wt细胞;当HEK293/tau同时过度表达PP2A时,凋亡率显著上升,同时tau蛋白在ser198/ser199/ser202位点发生去磷酸化,抗凋亡因子Bcl-2 ser87位点磷酸化水平显著升高;经相关性分析发现tau蛋白ser198/ser199/ser202位点的去磷酸化水平与抗凋亡因子Bcl-2的ser87位点磷酸化水平之间存在着正相关。结论:过度表达PP2A可通过使抗凋亡因子Bcl-2在ser87位点去磷酸化而抵抗细胞凋亡。过度表达tau蛋白具有抵抗细胞凋亡的作用;而当tau蛋白被去磷酸化时,可能通过上调抗凋亡因子Bcl-2磷酸化水平而使细胞发生凋亡。
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