目的研究人p21WAF基因对人胃癌细胞株AGS细胞survivin基因,以及hTERT、TRF1、TRF2和hPOT1等端粒相关基因表达水平的影响。方法采用克隆技术构建pEGFP-C2-p21真核表达质粒,经脂质体lipofectamine2000介导和G418筛选将pEGFP-C2-p21稳定转染AGS细胞;荧光显微镜观察报告基因pEGFP发出绿色荧光判定p21在AGS的表达效率和亚细胞定位;流式细胞术分析细胞周期;实时荧光定量PCR技术检测AGS细胞p21WAF、survivin、端粒相关基因hTERT、TRF1、TRF2及hPOT1 mRNA表达水平。结果PCR、酶切分析及DNA测序结果表明pEGFP-C2-p21真核表达载体序列和方向正确,p21WAF在AGS细胞稳定表达且主要定位于细胞核;mRNA显示转染pEGFP-C2-p21的P21WAF、survivin、hTERT、TRF1、TRF2及hPOT1基因mRNA分别为转染pEGFP-C2的324倍、1.6%、95%、97%、102%及99%;细胞周期分析显示稳定转染P21WAF基因AGS细胞阻滞于G1期。结论p21WAF基因在AGS细胞成功高表达使细胞周期阻滞于G1/S期,可能在AGS细胞胞核,通过调控细胞周期在转录水平抑制survivin基因表达水平,但对端粒相关基因hTERT、TRF1、TRF2和hPOT1的转录水平可能不起调控作用。
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